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RNAi沉默survivin基因表达对膀胱癌EJ细胞增殖的影响
引用本文:杨华安,苟欣,郑传东,吴跃,何卫阳. RNAi沉默survivin基因表达对膀胱癌EJ细胞增殖的影响[J]. 第三军医大学学报, 2008, 30(13): 1260-1263
作者姓名:杨华安  苟欣  郑传东  吴跃  何卫阳
作者单位:重庆医科大学附属第一医院泌尿外科,重庆,400016;重庆医科大学附属第一医院泌尿外科,重庆,400016;重庆医科大学附属第一医院泌尿外科,重庆,400016;重庆医科大学附属第一医院泌尿外科,重庆,400016;重庆医科大学附属第一医院泌尿外科,重庆,400016
摘    要:目的 通过RNA干扰(RNAi)阻断EJ细胞中survivin基因的表达,研究survivin基因沉默后对细胞生长和细胞凋亡的影响.方法 将合成的DNA正义链及反义链变性、退火,形成的双链DNA与pSilencer2.0线性质粒以T4 DNA连接酶连接,重组质粒经酶切、DNA测序鉴定后,用脂质体法转染EJ细胞,通过RT-PCR、免疫印迹检测干扰效果.MTT法检测细胞生长的影响,流式细胞仪检测转染后EJ细胞的凋亡变化.结果 酶切及测序证实设计合成的DNA片段已正确插入载体.RT-PCR、免疫印迹检测实验表明:pSilencer2.0-SVV1、pSilencer2.0-SVV2重组载体均能有效地阻断EJ细胞中survivin基因的表达,使survivin基因在mRNA和蛋白水平上的表达明显下调(P<0.01),后者抑制效果更佳.转染后的EJ细胞生长速度明显变慢.转染pSilencer2.0-SVV2实验组细胞的凋亡增加了17.0%.结论 重组真核载体能有效抑制EJ细胞的survivin表达,抑制细胞的增殖,诱导细胞凋亡.

关 键 词:RNA干扰  survivin  膀胱癌细胞

Effects of RNAi-silenced survivin gene on bladder cancer cell lines EJ
YANG Hua-an,GOU Xin,ZHENG Chuan-dong,WU Yue,HE Wei-yang. Effects of RNAi-silenced survivin gene on bladder cancer cell lines EJ[J]. Acta Academiae Medicinae Militaris Tertiae, 2008, 30(13): 1260-1263
Authors:YANG Hua-an  GOU Xin  ZHENG Chuan-dong  WU Yue  HE Wei-yang
Affiliation:YANG Hua-an,GOU Xin,ZHENG Chuan-dong,WU Yue,HE Wei-yang(Department of Urinary Surgery,The First Affiliated Hospital,Chongqing Medical University,Chongqing 400016,China)
Abstract:Objective To construct eukaryotic expression vectors by using the pSilencer2.0 vector for inhibiting human survivin gene by RNA interference,and to detect the effect of the silenced survivin gene on the growth and apoptosis of EJ cells.Methods Two target gene segments were synthesized and cloned into the pSilencer2.0 vector respectively to construct two recombinant eukaryotic expression vectors: pSilencer2.0-SVV1 and pSilencer2.0-SVV2,both of which were identified by enzyme digestion analysis and DNA sequen...
Keywords:survivin
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