| 抗人整合素ανβ3单链抗体的构建和表达 |
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| 引用本文： | 王臣,侯利华,张彦明,李建民,廖振林,杜桂鑫,陈薇,孙启鸿,童贻刚.抗人整合素ανβ3单链抗体的构建和表达[J].细胞与分子免疫学杂志,2004,20(2). |
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| 作者姓名： | 王臣 侯利华 张彦明 李建民 廖振林 杜桂鑫 陈薇 孙启鸿 童贻刚 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划 ( 86 3)资助 (No .2 0 0 1AA2 1 536 1 ) |
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| 摘 要： | 目的 :利用基因工程抗体技术构建抗人整合素ανβ3 单链抗体(scFv)。方法 :从分泌抗人整合素ανβ3 单抗 (mAb)的杂交瘤细胞E10总RNA中 ,用RT PCR扩增VH 和VL 基因 ,对其核苷酸序列分析后 ,通过PCR在VH 和VL 基因间插入柔性连接子(Gly4Ser) 3,组装成scFv基因 ,并克隆至原核表达载体pTIG TRX中。以重组子转化大肠杆菌BL2 1(DE3 )诱导目的基因表达。结果 :转化菌可表达相对分子质量 (Mr)为 3 10 0 0的scFv。Westernblot证实 ,具有His6标签蛋白的表达。经低剂量的IPTG诱导和较低温度培养 ,scFv获得了可溶性形式表达。表达产物经Ni NTA琼脂糖层析纯化后纯度达 91%以上。ELISA鉴定证实 ,scFv具有良好的抗原结合活性。结论 :成功地构建并表达抗人整合素ανβ3 的scFv ,为进一步临床研究奠定了基础。
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| 关 键 词： | 单链抗体 整合素ανβ3 构建 表达 |
Construction and expression of anti-human integrin ανβ3 scFv |
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