CAR菌TaqMan MGB探针法实时荧光定量PCR快速检测方法的建立与应用 |
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引用本文: | 高正琴,岳秉飞,关伟鸿.CAR菌TaqMan MGB探针法实时荧光定量PCR快速检测方法的建立与应用[J].中国比较医学杂志,2013(8):9-13,19. |
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作者姓名: | 高正琴 岳秉飞 关伟鸿 |
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作者单位: | 中国食品药品检定研究院,北京100050 |
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摘 要: | 目的建立特异、敏感、快速检测CAR菌的TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法。方法针对CAR菌16S rRNA基因序列设计特异性引物和探针,建立MGB探针荧光定量PCR方法,验证方法的特异性、敏感性和稳定性。对2008~2012年期间采集的1 344份临床标本中的CAR菌进行检测,同时进行普通PCR检测作为对照。结果 CAR菌TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法具有高度特异性,与肺炎支原体、侵肺巴斯德菌、支气管鲍特杆菌、肺炎克雷伯杆菌、大肠埃希菌、肺炎链球菌间无交叉反应,检测灵敏度达2.7拷贝。标准曲线显示各浓度范围内具有良好线性关系,相关系数为0.999,斜率为-3.22,TaqMan MGB探针荧光定量PCR效率为104.432%。对1 344份标本进行检测,结果 TaqMan MGB探针荧光定量PCR检出510份CAR菌阳性样本。TaqMan MGB探针荧光定量PCR能够直接从标本中检出CAR菌DNA,检测时间仅为40 min。结论 TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法具有可靠、特异、敏感的特点,适用于CAR菌的快速检测。
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关 键 词: | CAR菌 16SrRNA基因 小沟结合物探针 实时荧光定量PCR 快速检测 |
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