| pEGFP-C1-HSP27真核表达载体的构建及其稳定转染人胰腺癌SW1990细胞株的筛选 |
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| 引用本文： | 张松,陈敏,黄淑玲,许春红,李建琦,王军,邹晓平.pEGFP-C1-HSP27真核表达载体的构建及其稳定转染人胰腺癌SW1990细胞株的筛选[J].中华胰腺病杂志,2012,12(3). |
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| 作者姓名： | 张松 陈敏 黄淑玲 许春红 李建琦 王军 邹晓平 |
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| 作者单位： | 南京大学医学院附属鼓楼医院消化科,南京,210008 |
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| 摘 要： | 目的 构建表达热休克蛋白27( HSP27)的携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的真核载体,建立稳定表达HSP72的人胰腺癌SW1990细胞株.方法 采用RT-PCR法从SW1990细胞中扩增出带有BamH Ⅰ、HindⅢ酶切位点的HSP27基因片段,插入真核表达载体pEGFP-C1,鉴定正确后用重组质粒转染SW1990细胞,并筛选稳转细胞株.荧光显微镜观察HSP72的定位,RT-PCR、蛋白质印迹法检测转染细胞HSP27的表达.结果 双酶切法鉴定和测序证实重组载体pEGFP-C1 -HSP27的DNA序列完全正确,并成功转染SW1990细胞,筛选获得稳转细胞株.荧光显微镜见EGFP主要分布在胞质中,转染细胞的HSP27mRNA表达明显增加(1.458±0.160比0.897 ±0.051,P＜0.05),且表达HSP27与EGFP的融合蛋白.结论 成功构建真核表达载体pEGFP-C1-HSP27,并筛选获得稳转的细胞株.
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| 关 键 词： | 胰腺肿瘤 热休克蛋白类 转染 SW1990细胞株 基因携带体 |
Construction of pEGFP-C1-HSP27 recombinant eukaryotic expression vector and screening of human pancreatic cancer SW1990 cell line stably expressing HSP27 |
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| Authors: | ZHANG Song CHEN Min HUANG Shu-ling XU Chun-hong LI Jian-qi WANG Jun ZOU Xiao-ping |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Pancreatic neoplasms Heat-shock proteins Transfection SW1990 cell line Genetic carriers |
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