| 一个通用的TNFHis温度诱导融合表达载体的构建 |
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| 引用本文： | 韩苇,张英起,颜真,石继红.一个通用的TNFHis温度诱导融合表达载体的构建[J].药物生物技术,2002,9(6):317-321. |
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| 作者姓名： | 韩苇 张英起 颜真 石继红 |
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| 作者单位： | 第四军医大学生物技术中心,西安市710032 |
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| 摘 要： | 以pBVTNF为起始质粒,设计合成了2个DNA片段一个含有起始码、TNF起始码后的2个氨基酸序列和6个组氨酸序列;另一个含有Thrombin和hydroxylamine裂解位点序列.将上述2个合成DNA片段分别与pBVTNF载体重组,获得了一个通用的TNFHis表达载体.在该表达载体中,含有6×His的纯化标签和Thrombin和hydroxylamine融合蛋白裂解位点.分别将IFN﹑ IL-11和TNF基因插入该表达载体的多克隆位点,42℃诱导表达后,经SDS-PAGE分析,结果表明,所有插入基因都获得了较高水平的表达.薄层扫描结果证实,所有融合表达蛋白的表达量均占菌体总蛋白的20%以上.Western blot 检测显示,所有融合表达蛋白均可与抗TNF-α单抗发生免疫反应,间接证明融合蛋白均获得了表达.TNFHisTNF和TNFHisIFN在温度诱导表达后,菌体裂解液经Ni-NTA Agarose Beads亲和柱纯化,纯化结果表明,TNFHis中的6×His序列可与Ni-NTA Agarose Beads结合.此种纯化方式为融合表达蛋白的分离纯化提供了方便.
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| 关 键 词： | TNFHis 温度诱导 融合表达载体 构建 |
| 文章编号： | 1005-8915(2002)06-0317-05 |
Construction of TNF-Fusion Protein Expression Vector |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | pBVTNF |
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