融合MBP标签的重组人CD137L蛋白可溶性表达与纯化 |
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引用本文: | 吴晓晓,王淑珍.融合MBP标签的重组人CD137L蛋白可溶性表达与纯化[J].药物生物技术,2022(4):338-343. |
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作者姓名: | 吴晓晓 王淑珍 |
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作者单位: | 中国药科大学生命科学与技术学院 |
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基金项目: | 国家自然科学基金(No.81473126); |
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摘 要: | 本课题组前期构建了偶联有肿瘤抑素T7肽和人CD137L胞外域的重组融合蛋白(rhTCD),兼具抑制血管生成和刺激T细胞激活活性,但其在大肠杆菌中主要以包涵体的形式存在。本研究将rhTCD与麦芽糖结合蛋白(Maltose-binding protein, MBP)的基因融合共表达,以提高其可溶性表达并进行纯化。构建N端带有组氨酸(6×His)和MBP双标签的rhTCD重组表达载体,将其转化入大肠杆菌BL21(DE3)后在18℃0.5 mmol/L IPTG条件下诱导表达18 h,经Ni-NTA亲和层析法初步纯化后烟草蚀纹病毒蛋白酶(Tobacco etch virus, TEV)切割标签,再应用MBP亲和层析法纯化目的蛋白,通过银染和非变性凝胶电泳检测蛋白纯度、存在形式以及产量。SDS-PAGE电泳结果显示,融合His-MBP标签后目的蛋白rhTCD的可溶性表达量显著提高,以92.64%±4.24%的可溶性水平表达于上清中。Ni-NTA亲和层析纯化后,TEV蛋白酶高效切除了His-MBP标签。经MBP亲和层析纯化后,SDS-PAGE银染显示目的蛋白rhTCD纯度约为82.60%±0.63...
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关 键 词: | T7肽 CD137L 重组蛋白 MBP标签 融合表达 蛋白纯化 |
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