融合MBP标签的重组人CD137L蛋白可溶性表达与纯化

本课题组前期构建了偶联有肿瘤抑素T7肽和人CD137L胞外域的重组融合蛋白(rhTCD),兼具抑制血管生成和刺激T细胞激活活性，但其在大肠杆菌中主要以包涵体的形式存在。本研究将rhTCD与麦芽糖结合蛋白(Maltose-binding protein, MBP)的基因融合共表达，以提高其可溶性表达并进行纯化。构建N端带有组氨酸(6×His)和MBP双标签的rhTCD重组表达载体，将其转化入大肠杆菌BL21(DE3)后在18℃0.5 mmol/L IPTG条件下诱导表达18 h,经Ni-NTA亲和层析法初步纯化后烟草蚀纹病毒蛋白酶(Tobacco etch virus, TEV)切割标签，再应用MBP亲和层析法纯化目的蛋白，通过银染和非变性凝胶电泳检测蛋白纯度、存在形式以及产量。SDS-PAGE电泳结果显示，融合His-MBP标签后目的蛋白rhTCD的可溶性表达量显著提高，以92.64%±4.24%的可溶性水平表达于上清中。Ni-NTA亲和层析纯化后，TEV蛋白酶高效切除了His-MBP标签。经MBP亲和层析纯化后，SDS-PAGE银染显示目的蛋白rhTCD纯度约为82.60%±0.63...