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| 人精子DNA从头甲基化转移酶及甲基CpG结合蛋白的mRNA表达分析 | |
| 引用本文： | 刘特,赖东梅,程蔚蔚,邹刚,罗诚祖,刘志学. 人精子DNA从头甲基化转移酶及甲基CpG结合蛋白的mRNA表达分析[J]. 中国男科学杂志, 2008, 22(8) |
| 作者姓名： | 刘特 赖东梅 程蔚蔚 邹刚 罗诚祖 刘志学 |
| 作者单位： | 1. 上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院中心实验室,上海200030;同济大学生命科学与技术学院 2. 上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院中心实验室,上海,200030 3. 上海交通大学医学院附属仁济医院 4. 同济大学生命科学与技术学院 |
| 摘 要： | 目的 通过体外分离成熟的精子,利用实时荧光定量PCR(qRealTime-PCR)检测其是否表达DNA从头甲基化转移酶(DNMT1/3a/3b)及甲基CpG结合蛋白(MeCP2),为精子中甲基化表观修饰研究提供依据.方法 体外采集健康男性志愿者的精液标本,利用精子上游收集法获得具有活性的成熟精子.通过SYBR Green/PI双染色法,利用流式细胞术(FCM)检测精子样本的质膜完好性及其活性.抽提精子的总RNA,逆转录PCR获得cDNA,利用qRealTime-PCR鉴定精子甲基化转移酶及甲基CpG结合蛋白的mRNA表达情况.结果 SYBR Green/PI双染色和流式细胞仪检测发现,利用上游收集法可以收集SYBR Green /PI-的精子占总精子数的(94.513±1.120)%,表明该方法可以收集到质膜完好且活性强的精子.qRealTime-PCR结果显示,此样本精子中DNA从头甲基化转移酶的表达比较明显,而甲基CpG结合蛋白的表达量相当低.其中DNMT1的mRNA表达量较高(0.272±0.045,P＜0.05),DNMT3a和DNMT3b的表达水平比较弱[(4.930±0.01)E-006,(6.500±1.7)E-005,P＜0.05],而MeCP2几乎不表达[(2.12±0.91)E-006,p＜0.05].结论 利用qRealTime-PCR可以比较快速方便的检测出此次精子样本中DNA从头甲基化转移酶和甲基CpG结合蛋白的mRNA表达水平. |
| 关 键 词： | 精子 DNA从头甲基化转移酶 甲基CpG结合蛋白2 实时荧光定量PCR |
Analysis of the mRNAs of de novo DNA methyltransferase and methyl-CpG binding protein2 in human sperm |
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| Liu Te,Lai Dongmei,Cheng Weiwei,Zou Gang,Luo Chengzu,Liu Zhixue. Analysis of the mRNAs of de novo DNA methyltransferase and methyl-CpG binding protein2 in human sperm[J]. Chinese Journal of Andrology, 2008, 22(8) | |
| Authors: | Liu Te Lai Dongmei Cheng Weiwei Zou Gang Luo Chengzu Liu Zhixue |
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