| 摘 要： | 目的:探讨甲基转移酶样蛋白9(Mettl9)基因过表达对氧糖剥夺(OGD)大鼠离体星形胶质细胞损伤的影响及机制。方法:体外原代培养SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞,建立OGD诱导的星形胶质细胞损伤模型。实验分为正常对照(Con)组、慢病毒空载体转染(NC)组、慢病毒重组载体pLenti6.3-Mettl9转染组(Mettl9组)、正常对照+OGD处理(Con+OGD)组、慢病毒空载体转染+OGD处理(NC+OGD)组及慢病毒重组载体pLenti6.3-Mettl9+OGD处理(Mettl9+OGD)组。慢病毒载体pLenti6.3-Mettl9转染后48 h,收集细胞,采用RT-qPCR及Western blot法检测Mettl9的表达以验证转染效率。采用MTT法检测各组细胞活力;以乳酸脱氢酶(LDH)漏出率作为细胞损伤指标;RT-qPCR法检测Bcl-2和Bax的m RNA表达;Western blot法检测Bcl-2和Bax的蛋白表达。结果:慢病毒载体pLenti6.3-Mettl9转染星形胶质细胞后,RT-qPCR及Western blot检测结果显示Mettl9的m RNA和蛋白表达水平均升高(P0.05),获得了Mettl9基因过表达的星形胶质细胞。与Con组比较,Mettl9组星形胶质细胞的LDH漏出率升高,细胞活力下降(P0.05),促凋亡蛋白Bax的mRNA及蛋白表达升高,而抗凋亡蛋白Bcl-2的mRNA及蛋白表达降低(P0.05)。与Con+OGD组比较,Mettl9+OGD组星形胶质细胞的LDH漏出率显著升高,细胞活力显著下降(P0.05),Bax的mRNA及蛋白表达显著升高,而Bcl-2的mRNA和蛋白表达显著降低(P0.05)。结论:Mettl9基因过表达促进OGD大鼠离体星形胶质细胞损伤,其机制可能与调控Bcl-2/Bax信号通路有关。
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