| 摘 要： | 目的:评价小鼠乳腺癌4T1细胞分泌的外泌体(即肿瘤来源的细胞外囊泡,tumor-derived extracellular vesicles,tEVs)促进糖尿病小鼠创面愈合的效果,并探讨其作用机制。方法:差速离心法提取tEVs,透射电镜观察其形态,Western blot检测外泌体特异性蛋白TSG101和CD9的表达;用tEVs处理体外培养的小鼠成纤维细胞系L929和人脐静脉内皮细胞,探讨其对成纤维细胞活力和迁移,以及血管内皮细胞成管能力的影响。取20只6周龄C57BL/6雄性小鼠,腹腔注射链脲佐菌素诱导形成高血糖小鼠后,在其背部建立直径约0.7 cm的高血糖创面模型,之后将小鼠分为实验组和对照组(n=10),于第0、3和6天在创面四周的真皮层注射0.2 mL tEVs(含50μg)和等体积PBS。第1、7、18和25天观察并记录创面愈合情况;第7和14天,取创面皮肤组织常规石蜡切片,HE染色,评价创面愈合效果;免疫荧光检测血管标志物CD31的表达,探讨创面愈合过程中血管生成的变化。结果:tEVs呈圆形或杯状且比较均一,粒径大小约为40～150 nm,外泌体特异性蛋白TSG101和CD9均为阳性。体外细胞实验表明,tEVs能够促进L929细胞的生长和迁移,且可以促进人脐静脉内皮细胞的成管能力。动物体内实验表明,tEVs可以促进高血糖小鼠难愈创面愈合,且愈合效果良好。同时tEVs组可见创面新生组织中CD31的表达升高。结论:tEVs可以促进糖尿病小鼠创面的愈合,该过程可能与其参与增强成纤维细胞的活力和迁移能力以及促进血管生成有关。
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