| VSMC-Cx43-/-条件性基因敲除小鼠模型的构建及基因型鉴定 |
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| 引用本文： | 秦小江,侯晓敏,许欣荣,柴丽娜,杨晓宇,赵良渊,杜旭峰,施熠炜. VSMC-Cx43-/-条件性基因敲除小鼠模型的构建及基因型鉴定[J]. 环境卫生学杂志, 2022, 12(1): 18-24. DOI: 10.13421/j.cnki.hjwsxzz.2022.01.004 |
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| 作者姓名： | 秦小江 侯晓敏 许欣荣 柴丽娜 杨晓宇 赵良渊 杜旭峰 施熠炜 |
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| 作者单位： | 山西医科大学公共卫生学院,山西,太原030001,山西医科大学基础医学院,山西医科大学运动康复系,山西医科大学附属第一医院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;教育部重点实验室开放基金;山西省归国留学基金项目 |
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| 摘 要： | 目的应用CRISPR-Cas9技术和LoxP-Cre系统构建血管平滑肌缝隙连接蛋白Cx43条件性基因敲除小鼠(VSMC-Cx43-/-)模型。方法采用受精卵同源重组的方式,对Gja1基因进行flox修饰。通过体外转录的方式,获得Cas9 mRNA和gRNA;通过In-Fusion cloning的方法构建同源重组载体,该载体包含3.0 kb 5’同源臂、1.9 kb的flox区域和3.0 kb 3’同源臂。将Cas9 mRNA、gRNA和donor vector显微注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中,获得F0代小鼠。PCR扩增及测序鉴定阳性的F0代小鼠与C57BL/6J小鼠交配获得3只阳性F1代小鼠(Cx43flox/+)。将获得的flox杂合子Cx43flox/+小鼠自交,获得flox纯合子Cx43flox/flox小鼠。然后用Cx43flox/flox小鼠和Myh11-CreERT2小鼠交配,最终获得flox纯合且Cre阳性的实验组小鼠(该小鼠简写为:VSMC-Cx43-/-)和flox纯合且Cre阴性的对照组小鼠(Cx43flox/flox)。用PCR进行基因型鉴定,用Western blot技术检测Cx43在大脑中动脉、冠脉、肺动脉和肾动脉组织中的表达,以明确基因敲除小鼠是否构建成功。结果基因型鉴定、免疫荧光和Western blot检测结果表明VSMC-Cx43-/-基因敲除小鼠模型构建成功,小鼠一般性状无改变,小鼠大脑中动脉、冠脉、肺动脉和肾动脉组织中Cx43蛋白表达均下降。因此,可作为长期稳定模型研究血管平滑肌Cx43的功能。结论应用CRISPR-Cas9技术和LoxP-Cre系统成功构建了VSMC-Cx43-/-基因敲除小鼠模型,为深入研究Cx43在血管疾病中的作用提供工具。
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| 关 键 词： | 缝隙连接蛋白43(Cx43) 基因敲除小鼠 基因型鉴定 |
Construction of VSMC-Cx43-/-conditional knockout mouse model and genotype identification |
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| QIN Xiao-jiang,HOU Xiao-min,XU Xin-rong,CHAI Li-na,YANG Xiao-yu,ZHAO Liang-yuan,DU Xu-feng,SHI Yi-wei. Construction of VSMC-Cx43-/-conditional knockout mouse model and genotype identification[J]. Journal of Environmental Hygiene, 2022, 12(1): 18-24. DOI: 10.13421/j.cnki.hjwsxzz.2022.01.004 |
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| Authors: | QIN Xiao-jiang HOU Xiao-min XU Xin-rong CHAI Li-na YANG Xiao-yu ZHAO Liang-yuan DU Xu-feng SHI Yi-wei |
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| Affiliation: | (School of Public Health,Shanxi Medical University,Taiyuan 030001,China;Department of Pharmacology,Shanxi Medical University;Department of Sports Rehabilitation,Shanxi Medical University;First Clinical Medical School,Shanxi Medical University) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | connexins 43(Cx43) knockout mice genotyping |
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