1101/E-cadherin基因稳定转染小鼠胚胎干细胞及其对分化细胞黏附能力的影响（发英文）

背景：在胚胎期，上皮型钙粘蛋白的表达对于肝组织的形成有决定作用。目的：将上皮型钙粘蛋白基因转染小鼠胚胎干细胞，观察其对分化细胞间黏附能力变化的影响。设计、时间及地点：细胞学体外观察，于2007-12/2008-12在中山大学附属第一医院外科实验室完成。材料：清洁级BALB/c系孕13 d小鼠由中山大学实验动物中心提供。BALB/c系小鼠胚胎干细胞由中山大学眼科中心黄冰教授建系和保存。含CMV启动子的真核表达质粒pEGFP-N1由中山大学医学院吕志跃博士惠赠。方法：取BALB/c小鼠新鲜肝脏组织，提取总RNA，反转录合成cDNA。以合成的cDNA为模板，进行PCR扩增目的片段，将其和pEGFP-N1双酶切后连接构建pEGFP-上皮型钙粘蛋白，转染小鼠胚胎干细胞并进行体外分化。主要观察指标：RT-PCR及免疫细胞化学检测上皮型钙粘蛋白在分化系统中的动态表达，同时观察分化细胞间黏附能力的变化。结果：基因转染的胚胎干细胞分化后1~17 d稳定表达上皮型钙粘蛋白，而普通胚胎干细胞分化后上皮型钙粘蛋白的表达则逐渐降低。稳定表达上皮型钙粘蛋白的分化细胞间黏附能力明显增强，并在19 d时仍能保持致密的细胞连接和多层生长状态，普通胚胎干细胞则由拟胚体结构逐渐分化为松散的细胞群落。结论：稳定表达上皮型钙粘蛋白的胚胎干细胞分化后，细胞间黏附能力明显增强，并保持多层细胞生长状态。