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| SEA和喉癌MAGE-A3基因重组真核共表达载体的构建和鉴定 | |
| 引用本文： | 吉晓滨,吕景礼,陈敬贤,刘启才,谢景华. SEA和喉癌MAGE-A3基因重组真核共表达载体的构建和鉴定[J]. 中华临床医师杂志(电子版), 2012, 6(18): 5497-5502 |
| 作者姓名： | 吉晓滨 吕景礼 陈敬贤 刘启才 谢景华 |
| 作者单位： | 1. 510180,广州市第一人民医院耳鼻咽喉科 2. 广州医学院实验医学研究中心 3. 美国哥伦比亚大学医学院病理与细胞生物系 |
| 摘 要： | 目的构建超抗原SEA和喉癌来源的MAGE-A3基因共表达的真核表达载体,检测、鉴定其在293T细胞中的表达。方法分别用RT-PCR方法及人工化学合成法获得MAGE-A3和SEA基因片段,然后依次将MAGE-A3和SEA基因克隆至含内部核糖体进入位点的真核表达载体IRES序列的上、下游,构建成重组质粒pMAGEA3-IRES-SEA。经脂质体转染至293T细胞以后,用荧光定量PCR、蛋白免疫印迹分别鉴定SEA、MAGE-A3基因的表达。结果限制性内切酶酶切分析证实MAGE-A3基因和SEA基因均正确地克隆在pMAGEA3-IRES-SEA中,基因测序结果与GenBank公布的MAGE-A3、SEA序列完全一致,实现了双基因的正确重组。重组质粒转染293T细胞后能检测到MAGE-A3、SEA基因的高水平表达。结论成功地构建了pMAGEA3-IRES-SEA真核表达质粒,并能在293T细胞中有效表达MAGE-A3和SEA蛋白,由此奠定了其作为抗喉癌DNA疫苗应用的基础。 |
| 关 键 词： | 葡萄球菌类毒素 超抗原 喉肿瘤 真核载体 基因克隆 MAGE-A3 |
Construction of eukaryotic coexpression vector of recombinant MAGE-A3 originating from laryngocarcinoma and Staphylococcal endotoxin A with stable expression of vector in 293T cells |
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| JI Xiao-bin , LV Jing-li , CHEN Jing-xian , LIU Qi-cai , XIE Jiang-hua. Construction of eukaryotic coexpression vector of recombinant MAGE-A3 originating from laryngocarcinoma and Staphylococcal endotoxin A with stable expression of vector in 293T cells[J]. Chinese Journal of Clinicians(Electronic Version), 2012, 6(18): 5497-5502 | |
| Authors: | JI Xiao-bin LV Jing-li CHEN Jing-xian LIU Qi-cai XIE Jiang-hua |
| Affiliation: | .Department of Otorhinolaryngology,Guangzhou Municipal First People′s Hospital,Guangzhou 510180,China |
| Abstract: | |
| Keywords: | Staphylococcal endotoxin Superantigen Laryngeal carcinoma Eukaryotic vector Gene cloning MAGE-A3 genes |
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