| 腺病毒介导的人内皮型一氧化氮合酶基因和增强型绿色荧光蛋白基因在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 王一平,谭艳,王家宁,张少峰,郭凌郧,孔霞,罗超.腺病毒介导的人内皮型一氧化氮合酶基因和增强型绿色荧光蛋白基因在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达[J].郧阳医学院学报,2008,27(2):97-101. |
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| 作者姓名： | 王一平 谭艳 王家宁 张少峰 郭凌郧 孔霞 罗超 |
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| 作者单位： | 王一平（郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所,湖北,十堰442000）;谭艳（郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所,湖北,十堰442000;郧阳医学院附属人民医院泌尿外科研究所,湖北,十堰442000;郧阳医学院基础医学研究所,湖北,十堰442000;郧阳医学院药理学教研室,湖北,十堰442000）;王家宁（郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所,湖北,十堰442000）;张少峰（郧阳医学院附属人民医院泌尿外科研究所,湖北,十堰442000）;郭凌郧（郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所,湖北,十堰442000）;孔霞（郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所,湖北,十堰442000）;罗超（郧阳医学院基础医学研究所,湖北,十堰442000） |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金
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教育部科学技术研究项目
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湖北省自然科学基金
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教育厅中青年项目
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郧阳医学院博士研究生启动金
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十堰市人民医院研究生启动金资助项目 |
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| 摘 要： | 目的:研究腺病毒载体介导人内皮型一氧化氮合酶(human endothelial nitric oxide synthase,heNOS)和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)在体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymalstem cells,MSCs)的表达。方法:体外培养、扩增大鼠骨髓间充质干细胞,并对培养的细胞进行成骨、成脂肪诱导分化和细胞免疫表型鉴定;用Pme I线性化后去磷酸化的pShuttle-heNOS-EGFP转化含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的感受态BJ 5183,使其在细菌内发生同源重组,获得阳性重组质粒pAdEasy-heNOS-EGFP。重组质粒经PCR、酶切和测序鉴定正确后经PacⅠ酶切,转入AD 293细胞,包装成重组腺病毒Ad-heNOS-EGFP。用重组腺病毒Ad-heNOS-EGFP对MSCs进行转染,并用荧光显微镜及免疫荧光染色法观察转染细胞内EGFP和heNOS蛋白质的表达。结果:pShuttle-heNOS-EGFP与pAdeasy-1在BJ 5183中成功地发生了同源重组,得到了重组腺病毒质粒pAdEasy-heNOS-EGFP。重组质粒在AD 293细胞中包装成重组腺病毒Ad-heNOS-EGFP。经基因转染的MSCs中高表达heNOS和EGFP。结论:采用腺病毒载体可以将外源性的heNOS基因转染至MSCs中,并得到有效表达,且携带的EGFP标记可以直观地检测靶细胞感染和外源基因的表达情况,这将为勃起功能障碍的细胞治疗提供一条新的途径。
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| 关 键 词： | 人内皮型一氧化氮合酶 增强型绿色荧光蛋白 腺病毒载体 间充质干细胞 |
| 文章编号： | 1006-9674(2008)02-0097-05 |
| 修稿时间： | 2008年1月10日 |
Adenovirus-mediated Expression of Human Endothelial Nitric Oxide Synthase and Enhanced Green Fluorescent Protein in Rat Mesenchymal Stem Cells |
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| WANG Yi-ping,TAN Yan,,WANG Jia-ning,ZHANG Shao-feng,GUO Ling-yun,KONG Xia,LUO Chao.Adenovirus-mediated Expression of Human Endothelial Nitric Oxide Synthase and Enhanced Green Fluorescent Protein in Rat Mesenchymal Stem Cells[J].Journal of Yunyang Medical College,2008,27(2):97-101. |
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| Authors: | WANG Yi-ping TAN Yan WANG Jia-ning ZHANG Shao-feng GUO Ling-yun KONG Xia LUO Chao |
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| Institution: | 1Institute of Clinical Medicine;2Institute of Urology;Renmin Hospital;3Institute of Basic Medicine;4Department of Pharmacology;Yunyang Medical College;Shiyan;Hubei 442000;China |
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| Abstract: | Objective To investigate the expression of human endothelial nitric oxide synthase(heNOS) and enhanced green fluorescent protein(EGFP) in rat mesenchymal stem cells cultured in vitro.Methods Mesenchymal stem cells(MSCs) were isolated from bone marrow of new-born SD rats and expanded in vitro.MSCs were identified with their abilities to differentiate into adipogenic and osteogenic lineages and their immunophenotype of CD44,CD45 and CD90.The vector pShuttle-heNOS-EGFP was linearized with Pme I and transformed... |
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| Keywords: | Human endothelial nitric oxide synthase Enhanced green fluorescent protein Adenovirus vector Mesenchymal stem cells |
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