| 人骨生成诱导因子基因慢病毒载体构建及在人主动脉平滑肌细胞中稳定过表达 |
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| 引用本文： | 张惠洁,刘卉芳,张晓娜,陈凤玲.人骨生成诱导因子基因慢病毒载体构建及在人主动脉平滑肌细胞中稳定过表达[J].蚌埠医学院学报,2012,37(11):1273-1276. |
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| 作者姓名： | 张惠洁 刘卉芳 张晓娜 陈凤玲 |
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| 作者单位： | 上海交通大学医学院附属第三人民医院,内分泌科,上海,201900;上海交通大学医学院附属瑞金医院,上海市内分泌代谢病研究所,上海,200025 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金面上项目,上海交通大学校基金资助项目,上海交通大学新百人计划,上海交通大学医学院附属第三人民医院院基金资助项目 |
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| 摘 要： | 目的:构建人骨生成诱导因子基因(osteoinductive factor,OIF)慢病毒载体,并在人主动脉平滑肌细胞(human aorticsmooth muscle cell,HASMC)中稳定过表达OIF。方法:PCR扩增OIF-3FLAG,并克隆到慢病毒载体pMSCV PIG中,构建慢病毒表达载体pMSCV PIG-OIF-3FLAG,并测序鉴定。应用脂质体将pMSCV PIG-OIF-3FLAG或pMSCV PIG与VSVG、GAG-POL共转染293T细胞,48 h后收集细胞上清,感染HASMC,48 h后加入嘌呤霉素4 d,即筛选出稳定过表达pMSCV PIG-OIF-3FLAG的HASMC细胞株,采用real-time PCR和Western blot检测OIF mRNA和蛋白表达。结果:构建OIF基因慢病毒表达载体pMSCV PIG-OIF-3FLAG,经酶切及测序后证实目的基因的插入位点和读码框正确;包装病毒感染HASMC,经real-time PCR和Western blot检测证实OIF mRNA和蛋白水平在该细胞株中高表达。结论:成功构建人OIF基因的慢病毒载体,并获得稳定过表达该基因的HASMC。
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| 关 键 词： | 人骨生成诱导因子 慢病毒载体 过表达 人主动脉平滑肌细胞 |
Construction of human osteoinductive factor gene lentivirus vector and stable over-expression in human aortic smooth muscle cells |
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| ZHANG Hui-jie,LIU Hui-fang,ZHANG Xiao-na,CHEN Feng-ling.Construction of human osteoinductive factor gene lentivirus vector and stable over-expression in human aortic smooth muscle cells[J].Journal of Bengbu Medical College,2012,37(11):1273-1276. |
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| Authors: | ZHANG Hui-jie LIU Hui-fang ZHANG Xiao-na CHEN Feng-ling |
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| Institution: | 1 (1.Department of Endocrinology,The Third People′s Hospital Affiliated to Shanghai Jiao Tong University School of Medicine,Shanghai 201900;2 Shanghai Institution of Endocrinology,Ruijin Hospital Affiliated to Shanghai Jiao Tong University School of Medicine,Shanghai 200025,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | |
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