| 蛋白酪氨酸磷酸酯酶4A2基因的克隆、表达及活性鉴定 |
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| 引用本文： | 程超,郭爱林,巫国勇,吴伟康,罗红鹤,钟佛添.蛋白酪氨酸磷酸酯酶4A2基因的克隆、表达及活性鉴定[J].中山医科大学学报,2007,28(2):137-141. |
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| 作者姓名： | 程超 郭爱林 巫国勇 吴伟康 罗红鹤 钟佛添 |
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| 作者单位： | [1]中山大学附属第一医院胸外科,广东广州510080 [2]广东省人民医院医学研究中心,广东广州510080 [3]中山大学基础医学院病理生理教研室,广东广州510080 |
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| 基金项目： | 国家自然基金资助项目（No.30100218）;广东省科技厅资助项目（No.2004830301010） |
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| 摘 要： | 【目的】获取人蛋白酪氨酸磷酸酯酶4A2（PTP4A2）基因并高效表达纯化,对于产物的体外活性进行测定。【方法】用RT-PCR技术,从肝癌细胞系HepG2的总RNA中,获得编码PTP4A2基因功能片段的DNA。测序后,通过酶切亚克隆至表达载体pGEX-4T-2,构建重组表达载体,并导入大肠杆菌E.coliBL21中,IPTG诱导表达重组的GST融合蛋白。对重组融合蛋白过谷胱甘肽琼脂糖柱进行纯化,western印记进行鉴定,质谱检测蛋白分子量。通过其对底物磷酸多肽的去磷酸化反应,鉴定其活性。【结果】获得编码肝癌细胞PTP4A2（全长氨基酸）的基因序列,测序结果与已发表的基因序列相一致。重组GST融合蛋白经western分析,在相对分子质量Mr=45000处,有特异的蛋白条带。重组蛋白经谷胱甘肽琼脂糖柱进行纯化后,得到了高纯度的融合蛋白,质谱检测其分子量为45470.6。底物多肽去磷酸化反应表明纯化产物具有较强活性。【结论】成功克隆人PTP4A2基因,并在E.coliBL21中高效表达,亲和层析后获得高纯度GST融合蛋白,质谱检测分子量与预期结果一致,纯化产物具有蛋白磷酸酯酶活性。
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| 关 键 词： | 蛋白酪氨酸磷酸酯酶 基因克隆 表达 纯化 质谱 |
| 文章编号： | 1672-3554（2007）02-0137-05 |
| 修稿时间： | 2006-10-25 |
Cloning, Expression, and Purification of Human Protein Tyrosine Phosphatase Type 4A2 |
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| CHENG Chao, GUO Ai-lin, WU Guo-yong, WU Wei-kang, LUO Hong-he, ZHONG Fo-tian.Cloning, Expression, and Purification of Human Protein Tyrosine Phosphatase Type 4A2[J].Academic Journal of Sun Yat-sen University of Medical Sciences,2007,28(2):137-141. |
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| Authors: | CHENG Chao GUO Ai-lin WU Guo-yong WU Wei-kang LUO Hong-he ZHONG Fo-tian |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | protein tyrosine phosphatase clone express purify mass spectrometry |
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