二型谷氨酸羧肽酶稳定表达细胞株的建立

为了深入研究二型谷氨酸羧肽酶(glutamate carboxypeptidaseⅡ，GCPⅡ)功能和了解其在兴奋性氨基酸代谢过程中作用，拟构建GCPⅡ的表达载体，建立稳定表达细胞株；采用聚合酶链反应，酶切连接，和蓝白筛选的方法，构建表达载体；磷酸钙共沉淀的方法转染HEK293细胞，G418筛选阳性细胞克隆；逆转录聚合酶链反应和免疫荧光细胞染色的方法鉴定阳性细胞株。采用PCR方法扩增出GCPⅡ；构建含有GCPⅡ基因的表达载体——pcDNA3．1-NA；建立了细胞株HEK293-NA。成功构建了GCPⅡ的表达载体，建立了稳定表达细胞株，为深入研究该酶的功能和兴奋性氨基酸毒性作用奠定了基础。