| Tat融合蛋白表达载体TAT-c-Myc的克隆化及蛋白表达研究 |
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| 引用本文： | 王建军,万志红,赵平,靳雪源,谢国明,辛绍杰.Tat融合蛋白表达载体TAT-c-Myc的克隆化及蛋白表达研究[J].中华临床医师杂志(电子版),2015(5):788-792. |
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| 作者姓名： | 王建军 万志红 赵平 靳雪源 谢国明 辛绍杰 |
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| 作者单位： | 解放军第302医院国际肝病诊疗中心;解放军第302医院肝衰竭诊疗与研究中心 |
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| 摘 要： | 目的构建重组表达载体TAT-c-Myc,在E.coli BL21中高效表达并纯化融合蛋白。方法经PCR获得编码人c-Myc的全基因序列,含有设计的限制性酶切位点的产物连接到含有TAT转导结构的原核表达载体PET-28b-TAT-V2上,得到重组表达载体TAT-c-Myc,转化大肠杆菌,应用IPTG诱导TAT-c-Myc融合蛋白的表达。表达产物用SDS-PAGE鉴定,亲和层析柱纯化,并应用Western blot检测蛋白的特异性,融合蛋白转导人皮肤成纤维(HSF)细胞的效果应用免疫荧光检测。结果成功构建了TAT-c-Myc融合蛋白的原核表达载体,在诱导下获得了高效表达。Western blot检测提示融合蛋白有良好的特异性。免疫荧光检测提示融合蛋白具有快速转导入HSF细胞内的能力。结论为进一步的通过蛋白转导方式诱导多能干细胞提供了物质基础。
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| 关 键 词： | 原癌基因蛋白质c-myc 多能干细胞 蛋白转导结构域 载体构建 |
Construction of Vector TAT-c-Myc and expression of fusion protein |
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