小鼠神经元中CCK8与EGF协同作用的初步研究

目的: 探讨八肽胆囊收缩素(CCK₈)与表皮生长因子(EGF)在神经元信号转导中的交叉对话(cross-talk)及可能存在机制,并对CCK₈与EGF的协同作用进行初步研究。方法: CCK₈刺激表皮生长因子受体(EGFR)磷酸化的受体类型分析:培养的乳小鼠神经元随机分为对照组(等量的DMEM培养基)、CCK₈刺激组(10^-7 mol/L)、CCK_A受体拮抗剂L364 718组、CCK_B受体拮抗剂L365 260组以及L364 718+L365 260联合组(浓度均为10^-8 mol/L),拮抗剂加入10 min后再给予CCK₈,作用5 min后收集细胞提取蛋白,Western blotting检测磷酸化表皮生长因子受体(p-EGFR)蛋白表达量的变化;CCK₈与EGF对神经元EGFR磷酸化状态的影响和CCK₈与EGF协同作用功效分析:培养的乳小鼠神经元随机分为对照组、CCK₈(10^-7 mol/L)组、EGF(40 μg/L)组以及CCK₈+EGF组,药物作用5 min后终止反应,处理和分析方法同前,同时通过MTT法检测各组神经元培养不同时间(24、48、72、96 h)后细胞的生长活性。结果: (1)2种CCK受体拮抗剂均可降低EGFR蛋白的磷酸化水平,其中A型受体拮抗剂的作用明显强于B型,2种拮抗剂同时作用对EGFR蛋白磷酸化水平的降低作用更为明显;(2)CCK₈和EGF分别刺激神经元后,EGFR的磷酸化水平均增强,但CCK₈+EGF刺激后表现更为显著;(3)CCK₈与EGF联用对增强神经元生长活性和延长其存活时间的作用较两药单独作用效果更为明显(P<0.05)。结论: (1)CCK_A和CCK_B受体均介导了CCK₈激活EGFR磷酸化的信号转导途径,但A型受体发挥了更为重要的作用;(2)CCK₈与EGF信号转导途径之间存在着cross-talk;(3)CCK₈与EGF可能通过信号转导的cross-talk协同促进小鼠神经元的生长与存活。

Cross talk of CCK8 and EGF in mouse neurons

AIM:To explore the mechanism of signaling transduction and cross talk between cholecystokinin octapeptide(CCK_8)and epidermal growth factor(EGF)in mouse neurons and to observe the effect of CCK_8 in coordination with EGF on neuron growth and cell viability.METHODS:For determining which kind of CCK receptor mediated the phosphorylation of EGF receptor,the cultured neurons were randomly divided into control group,CCK_8 stimulation group, CCK_A receptor antagonist group,CCK_B receptor antagonist group,and CCK_...