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| pIRES2-EGFP-BCL11B真核表达载体体外表达的动态分析 | |
| 引用本文： | 陈思,黄欣,杨力建,陈少华,郑海涛,沈琦,李萡,李扬秋. pIRES2-EGFP-BCL11B真核表达载体体外表达的动态分析[J]. 中国病理生理杂志, 2011, 27(5): 944-950. DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2011.05.021 |
| 作者姓名： | 陈思 黄欣 杨力建 陈少华 郑海涛 沈琦 李萡 李扬秋 |
| 作者单位： | 1. 暨南大学 医学院血液病研究所,广东 广州 510632; 2. 深圳大学医学院免疫学教研室,广东 深圳 518060; 3. 暨南大学 教育部再生医学重点实验室,广东 广州 510632 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目,广东省科技计划资助项目 |
| 摘 要： | 目的: 研究真核表达载体pIRES2-EGFP-BCL11B(B细胞白血病/淋巴瘤11B基因)在K293(人胚肾细胞株)和Raji(人Burkitt 淋巴瘤细胞株)细胞中的表达情况。方法: 分别利用脂质体和核转染技术将真核表达载体pIRES2-EGFP-BCL11B(pBCL11B)转染至K293和Raji细胞中,并设立空质粒组(pI2)和空转染组(MOCK)作为对照。通过荧光显微镜和流式细胞仪检测转染后48 h各组EGFP的表达,确定转染效率。通过荧光实时定量PCR(Taqman)技术检测转染后24 h各组BCL11B mRNA的表达情况,通过Western blotting技术检测转染后48 h各组BCL11B蛋白的表达情况。高分辨率活细胞成像系统动态观察转染后36-72 h重组质粒在Raji细胞增殖过程中的表达。结果: K293细胞pBCL11B、pI2和MOCK组的转染效率分别为(71.23±4.62)%、(70.45±3.58)%和(0.30±0.10)%,而Raji细胞各组的转染效率分别为(23.12±5.94)%、(22.48±6.25)%和(0.30±0.10)%。实时定量PCR和Western blotting结果显示转染后pBCL11B组在mRNA和蛋白水平均能检测到 BCL11B 基因的有效表达,BCL11B的表达量均明显高于pI2组和MOCK组(P<0.05)。活细胞追踪显示转染后36-72 h重组质粒在细胞中可稳定表达且转染后的细胞可以正常分裂增殖。结论: 系统分析了真核表达载体pIRES2-EGFP-BCL11B转染至K293和Raji细胞的表达变化特点,转染后可以检测到该基因的有效上调,研究结果为下一步转染正常人T细胞奠定了基础。 |
| 关 键 词： | 基因 BCL11B 真核表达载体 K293细胞 Raji细胞 |
| 收稿时间： | 2010-08-31 |
Dynamic analysis of in vitro expression of B-cell lymphoma/leukemia 11B gene by eukaryotic expressive plasmid pIRES2-EGFP-BCL11B |
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| CHEN Si,HUANG Xin,YANG Li-jian,CHEN Shao-hua,ZHENG Hai-tao,SHEN Qi,LI Bo,LI Yang-qiu. Dynamic analysis of in vitro expression of B-cell lymphoma/leukemia 11B gene by eukaryotic expressive plasmid pIRES2-EGFP-BCL11B[J]. Chinese Journal of Pathophysiology, 2011, 27(5): 944-950. DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2011.05.021 | |
| Authors: | CHEN Si HUANG Xin YANG Li-jian CHEN Shao-hua ZHENG Hai-tao SHEN Qi LI Bo LI Yang-qiu |
| Affiliation: | 1. Institute of Hematology, School of Medicine,Jinan University, Guangzhou 510632, China; 2. Department of Immunology, Shenzhen University, Shenzhen 518060, China; 3. Key Laboratory for Regenerative Medicine of Ministry of Education, Jinan University, Guangzhou 510632, China |
| Abstract: | AIM: To analyze the ability of eukaryotic expressive plasmid pIRES2-EGFP-BCL11B to express B-cell lymphoma/leukemia 11B(BCL11B) gene in K293 and Raji cells.METHODS: The eukaryotic expressive plasmid pIRES2-BCL11B-EGFP(pBCL11B) was transfected into K293 cells and Raji cells by the techniques of Lipofectamine and Nucleofector transfection,respectively.Empty plasmid(pI2) and mock-transfection(MOCK) were used as controls.The transfection efficiency was examined by the methods of fluorescence microscopy and flow... |
| Keywords: | Genes BCL11B Eukaryotic expression vector K293 cells Raji cells |
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