TCR Vα23-Vβ13 基因修饰T细胞及其特异性细胞毒活性研究 |
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作者姓名: | 尹青松 谭获 杨力建 陈少华 查显丰 叶静梅 李扬秋 |
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作者单位: | 1. 河南省肿瘤医院,河南 郑州 450008; 2. 暨南大学医学院血液病研究所, 广东 广州 510632; 3. 广州医学院第一附属医院肿瘤血液中心,广东 广州 510260; 4. 暨南大学再生医学教育部重点实验室, 广东 广州 510632 |
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基金项目: | 国家高技术研究发展计划资助项目,广东自然科学基金重点资助项目 |
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摘 要: | 目的: 分析弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)抗原特异T细胞受体(TCR) Vα23-Vβ13 基因修饰T细胞后的体外特异性杀伤活性。方法:扩增并克隆已鉴定的DLBCL患者外周血中单克隆增殖T细胞的TCR Vβ13 和TCR Vα23 基因全长序列,构建TCR Vβ13 -IRES-TCR- Vα23 双基因重组质粒,经核转染的方法将其转染正常人T细胞,通过real-time PCR和Western blotting检测TCR Vβ13 和TCR Vα23 这2个外源基因在mRNA和蛋白水平的体外表达情况,并对TCR转基因T细胞进行体外细胞毒性检测。结果:经酶切分析和核酸序列测定证实重组质粒构建正确,转染正常人T细胞后,TCR Vβ13 和TCR Vα23 在mRNA及蛋白水平实现了共表达。转染后3 d,TCR转基因T细胞对DLBCL细胞株Toledo细胞的杀伤活性明显高于非特异细胞株Raji细胞和Molt-4细胞,显示出特异性细胞毒活性。结论:成功构建DLBCL相关抗原特异的TCR Vβ13 -IRES-TCR Vα23 双基因真核表达质粒;TCR基因修饰T细胞可获得特异性细胞毒活性。
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关 键 词: | 弥漫大B细胞淋巴瘤 TCR转基因 细胞毒活性 |
收稿时间: | 2010-07-14 |
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