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HA-2FKBP-ABD融合蛋白的原核表达及与BCR-ABL的相互作用
引用本文:高淼,黄峥兰,李千音,李会,钟梁,冯文莉. HA-2FKBP-ABD融合蛋白的原核表达及与BCR-ABL的相互作用[J]. 临床检验杂志, 2013, 31(4): 268-271
作者姓名:高淼  黄峥兰  李千音  李会  钟梁  冯文莉
作者单位:重庆医科大学临床血液学教研室,教育部临床检验诊断学重点实验室,重庆400016;重庆医科大学临床血液学教研室,教育部临床检验诊断学重点实验室,重庆400016;重庆医科大学临床血液学教研室,教育部临床检验诊断学重点实验室,重庆400016;重庆医科大学临床血液学教研室,教育部临床检验诊断学重点实验室,重庆400016;重庆医科大学临床血液学教研室,教育部临床检验诊断学重点实验室,重庆400016;重庆医科大学临床血液学教研室,教育部临床检验诊断学重点实验室,重庆400016
基金项目:国家自然科学基金(81070421)。
摘    要:摘要:目的:构建经原核表达和纯化的HA-2FKBP-ABD(HF-2A)融合蛋白,探讨HF-2A对BCR-ABL的靶向作用。 方法:用PCR扩增HF-2A片段,将HF-2A克隆入pET32a(+)原核表达载体,IPTG诱导表达,镍离子亲和层析柱纯化HF-2A蛋白,SDS-PAGE分析诱导和纯化的条件,western blot鉴定HF-2A蛋白的表达,pull down实验检测HF-2A与BCR-ABL的相互作用。 结果:重组原核表达载体经PCR、双酶切及测序鉴定证明构建正确;0.1 mmol/L IPTG 25 ℃诱导4 h获得HF-2A蛋白的高表达,其分子量(Mr)约为74 000,纯化后可获得高纯度的HF-2A蛋白;HF-2A与BCR-ABL能相互作用。 结论:成功表达并纯化了HF-2A融合蛋白,HF-2A能够靶向作用BCR-ABL。

关 键 词:原核表达;蛋白质纯化;BCR-ABL;慢性粒细胞白血病;ABL结合结构域
收稿时间:2012-06-01
修稿时间:2012-10-27

Prokaryotic expression of HA-2-FKBP-ABD fusion protein and its interaction with BCR-ABL
Abstract:
Keywords:prokaryotic expression   protein purification   BCR-ABL   chronic myeloid leukemia   Abl binding domain
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