HA-2FKBP-ABD融合蛋白的原核表达及与BCR-ABL的相互作用 |
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引用本文: | 高淼,黄峥兰,李千音,李会,钟梁,冯文莉. HA-2FKBP-ABD融合蛋白的原核表达及与BCR-ABL的相互作用[J]. 临床检验杂志, 2013, 31(4): 268-271 |
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作者姓名: | 高淼 黄峥兰 李千音 李会 钟梁 冯文莉 |
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作者单位: | 重庆医科大学临床血液学教研室,教育部临床检验诊断学重点实验室,重庆400016;重庆医科大学临床血液学教研室,教育部临床检验诊断学重点实验室,重庆400016;重庆医科大学临床血液学教研室,教育部临床检验诊断学重点实验室,重庆400016;重庆医科大学临床血液学教研室,教育部临床检验诊断学重点实验室,重庆400016;重庆医科大学临床血液学教研室,教育部临床检验诊断学重点实验室,重庆400016;重庆医科大学临床血液学教研室,教育部临床检验诊断学重点实验室,重庆400016 |
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基金项目: | 国家自然科学基金(81070421)。 |
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摘 要: | 摘要:目的:构建经原核表达和纯化的HA-2FKBP-ABD(HF-2A)融合蛋白,探讨HF-2A对BCR-ABL的靶向作用。 方法:用PCR扩增HF-2A片段,将HF-2A克隆入pET32a(+)原核表达载体,IPTG诱导表达,镍离子亲和层析柱纯化HF-2A蛋白,SDS-PAGE分析诱导和纯化的条件,western blot鉴定HF-2A蛋白的表达,pull down实验检测HF-2A与BCR-ABL的相互作用。 结果:重组原核表达载体经PCR、双酶切及测序鉴定证明构建正确;0.1 mmol/L IPTG 25 ℃诱导4 h获得HF-2A蛋白的高表达,其分子量(Mr)约为74 000,纯化后可获得高纯度的HF-2A蛋白;HF-2A与BCR-ABL能相互作用。 结论:成功表达并纯化了HF-2A融合蛋白,HF-2A能够靶向作用BCR-ABL。
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关 键 词: | 原核表达;蛋白质纯化;BCR-ABL;慢性粒细胞白血病;ABL结合结构域 |
收稿时间: | 2012-06-01 |
修稿时间: | 2012-10-27 |
Prokaryotic expression of HA-2-FKBP-ABD fusion protein and its interaction with BCR-ABL |
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Abstract: | |
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Keywords: | prokaryotic expression protein purification BCR-ABL chronic myeloid leukemia Abl binding domain |
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