摘 要: | 目的 为在体外考察微管结合蛋白STOP对孤独症谱系障碍BTBR小鼠少突胶质细胞髓鞘形成的影响,建立一种较高纯化率的BTBR小鼠大脑皮质少突胶质前体细胞的原代培养方法,利用慢病毒载体建立一种高转染效率的BTBR小鼠大脑皮质少突胶质前体细胞过表达STOP基因的转染方法。方法 以BTBR乳鼠作为实验对象,每次取6~10只,独立重复3次,0.25%胰蛋白酶消化制备成单细胞悬液,采用免疫磁珠细胞分选法获得原代少突胶质前体细胞。取原代培养的少突胶质前体细胞,利用我们前期构建的STOP基因载体进行转染实验,转染72~96 h后,在荧光显微镜下观察细胞携带荧光的显色情况。结果 采用免疫磁珠细胞分选法提取的BTBR小鼠大脑皮质原代少突胶前体细胞在48 h后基本完全贴壁,细胞生长状态好,培养第5天,免疫荧光法鉴定显示,细胞纯度极高可达95%。建立了一种转染效率较高的BTBR小鼠原代少突胶质前体细胞的慢病毒转染方法,高内涵显微镜拍摄后显示,细胞荧光表达明显,将少突胶质前体细胞的慢病毒转染率提高到60%~70%。结论 成功分选培养获得纯度较高的BTBR小鼠大脑皮质原代少突胶质前体细胞,成功建立了一种转染率较高...
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