STOP基因慢病毒载体转染BTBR小鼠少突胶质前体细胞的方法

目的 为在体外考察微管结合蛋白STOP对孤独症谱系障碍BTBR小鼠少突胶质细胞髓鞘形成的影响，建立一种较高纯化率的BTBR小鼠大脑皮质少突胶质前体细胞的原代培养方法，利用慢病毒载体建立一种高转染效率的BTBR小鼠大脑皮质少突胶质前体细胞过表达STOP基因的转染方法。方法 以BTBR乳鼠作为实验对象，每次取6～10只，独立重复3次，0.25%胰蛋白酶消化制备成单细胞悬液，采用免疫磁珠细胞分选法获得原代少突胶质前体细胞。取原代培养的少突胶质前体细胞，利用我们前期构建的STOP基因载体进行转染实验，转染72～96 h后，在荧光显微镜下观察细胞携带荧光的显色情况。结果 采用免疫磁珠细胞分选法提取的BTBR小鼠大脑皮质原代少突胶前体细胞在48 h后基本完全贴壁，细胞生长状态好，培养第5天，免疫荧光法鉴定显示，细胞纯度极高可达95%。建立了一种转染效率较高的BTBR小鼠原代少突胶质前体细胞的慢病毒转染方法，高内涵显微镜拍摄后显示，细胞荧光表达明显，将少突胶质前体细胞的慢病毒转染率提高到60%～70%。结论 成功分选培养获得纯度较高的BTBR小鼠大脑皮质原代少突胶质前体细胞，成功建立了一种转染率较高...