肠出血型大肠埃希菌O157：H7 EspF蛋白多克隆抗体的制备和初步纯化

目的制备肠出血型大肠埃希菌（EHEC）O157：H7EspF蛋白多克隆抗体并初步纯化。方法生物信息学方法分析EHECO157：H7EspF蛋白的柔韧性、亲水性、表面可能性及抗原表位,选取1条由15个氨基酸残基组成的多肽为半抗原,在其C端偶联钥孔血蓝蛋白（KLH）,免疫新西兰大白兔制备抗血清。ELISA测定抗血清效价,免疫印迹法鉴定其特异性,辛酸-硫酸铵法初步纯化抗血清,SDS-PAGE检测抗体纯度。结果选择EspF蛋白抗原指数最高的肽段72-TPSRPAPPPPTSGQA-86（0.506）为半抗原,合成抗原多肽经高效液相色谱鉴定,纯度为95.78%,经质谱分析其分子量为1563.76Mr,与目的多肽分子量一致;加强免疫3次后,EHECO157：H7EspF蛋白的抗血清效价达1：2048000;该血清对EHECO157：H7野生株和espF突变株（△espF）的EspF蛋白均有特异性,并经辛酸-硫酸铵法获得一定纯度的抗体。结论成功地制备了效价高、特异性强的EHECO157：H7EspF蛋白多克隆抗体。