microRNA-127抑制葡萄膜黑色素瘤细胞增殖的表观遗传调控研究

目的：研究microRNA-127（miR-127）在人葡萄膜黑色素瘤细胞中的表达水平及其对细胞增殖的影响。方法：实验研究。通过实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测miR-127在葡萄膜黑色素瘤细胞M23和SP6.5与正常葡萄膜黑色素细胞UM95中的表达水平。细胞实验通过阳离子脂质体介导的方法将miR-127和阴性对照（NC）转染入M23和SP6.5中，并应用细胞增殖实验法（MTS法）和流式细胞技术分别检测细胞增殖能力和细胞周期，采用Western Blot法检测转染miR-127后细胞周期相关蛋白的表达。另外，通过RT-qPCR检测用表观药物5-氮杂-2-脱氧胞苷（5-Aza-dC）和（或）曲古抑菌素A（TSA）处理后的M23和SP6.5细胞内miR-127的表达水平。MiR-127的表达量及细胞实验各参数在2组间比较采用独立样本t检验。结果：miR-127在M23和SP6.5中的表达水平低于UM95（t=72.2、591.5，P<0.001）。MTS结果显示，在M23和SP6.5细胞中，转染miR-127组相对细胞数目较NC组的100%分别减少至（62.3±4.2）%和（65.4±2.3）%，差异具有统计学意义（t=12.7、21.6，P<0.001）。流式细胞技术分析显示，转染miR-127组处于G0/G1期的M23和SP6.5细胞数量比例明显高于NC组（t=-6.7，P=0.003；t=-9.9，P<0.001），同时处于S期的M23和SP6.5细胞数量比例明显低于NC组（t=8.6，P=0.001；t=12.7，P<0.001）。Western Blot结果表明miR-127可明显降低M23和SP6.5细胞内磷酸化Rb 蛋白的表达水平（t=22.2、15.6，P<0.001）。此外，miR-127在M23和SP6.5细胞中的表达可被5-Aza-dC和TSA诱导上调（P<0.05）。结论：miR-127通过抑制细胞周期而抑制人葡萄膜黑色素瘤细胞的增殖，并可被DNA甲基化和组蛋白乙酰化表观遗传机制调控。

Epigenetic regulation of MicrorNA-127 in the Inhibition of Uveal Melanoma cell Proliferation