结核分枝杆菌休眠生存调节子蛋白Rv2628的表达、纯化及其兔多克隆抗体的制备

目的 表达和纯化结核分枝杆菌休眠生存调节子蛋白Rv2628,制备并鉴定其兔多克隆抗体。方法 以结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA为模板，扩增Rv2628基因，构建重组表达质粒，转化至大肠杆菌表达菌株中，经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达，利用镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)层析柱纯化目的蛋白，以纯化Rv2628蛋白免疫新西兰大白兔获得兔多克隆抗体，分别利用Western blot法和间接ELISA验证多克隆抗体的特异性。结果 成功构建pET-30a-Rv2628重组载体，IPTG诱导后Rv2628蛋白在大肠杆菌主要以包涵体形式表达，Ni-NTA层析柱纯化获得高纯度Rv2628蛋白。免疫兔后获得兔抗Rv2628多克隆抗体具有良好的抗原结合特性，且抗体效价达1∶1 093 500。结论 成功制备高纯度Rv2628蛋白及高效价兔抗Rv2628多克隆抗体。