血管内皮生长因子体外诱导CD34+造血干/祖细胞信号传导与转录活化因子的活化 |
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引用本文: | Ye F,Ye DF,Xie X,Chen HZ,Lü WG.血管内皮生长因子体外诱导CD34+造血干/祖细胞信号传导与转录活化因子的活化[J].中国医学科学院学报,2004,26(1):12-17. |
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作者姓名: | Ye F Ye DF Xie X Chen HZ Lü WG |
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作者单位: | 浙江大学医学院,附属妇产科医院肿瘤科,杭州,310006 |
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摘 要: | 目的通过对血管内皮生长因子(VEGF)诱导CD34 造血干/祖细胞内信号传导与转录活化因子(STAT)活化的研究,探索VEGF作用于CD34 造血干/祖细胞的分子机制及其信号传导途径.方法利用磁活化细胞分选系统(MACS)分离并纯化脐血CD34 造血干/祖细胞,体外以重组人细胞因子VEGF(50 ng/ml)持续刺激不同时间(0,15,30,45,60,90min)后,提取细胞总蛋白,用Western blot检测CD34 造血干/祖细胞内STAT-3和STAT-5磷酸化;免疫细胞化学鉴定CD34 造血干/祖细胞表面VEGF受体-2(VEGFR2)的表达,以及VEGF刺激不同时间后CD34 造血干/祖细胞内磷酸化STAT-3和STAT-5有无发生转核;采用能与VEGFR2特异性结合的七肽ATWLPPR封闭VEGF与VEGFR2的结合,Western blot观察STAT-3和STAT-5的磷酸化是否被相应阻断.结果Western blot检测结果显示,CD34 细胞在VEGF刺激下,STAT-3和STAT-5均发生了磷酸化,50 ng/ml VEGF作用15 min后,即可检测到磷酸化的STAT-3和STAT-5的表达,并分别在30和45 min时达到峰值;之后开始下降,到90 min时均已检测不到,不同刺激时间组间有显著性差异(P=0.0001).免疫细胞化学显示VEGF能诱导磷酸化STAT-3发生转核并且在作用30 min时最为显著,不同刺激时间组间有显著性差异(P=0.0001),而磷酸化STAT-5在VEGF刺激的各时间组均未出现明显的转核现象(P>0.05).CD34 造血干/祖细胞表面有VEGF膜受体VEGFR2的表达,当ATWLPPR(80 μmol/L)特异性封闭VEGF与VEGFR2的结合后,STAT-3和STAT-5的磷酸化被完全阻断.结论STAT信号传导通路通过VEGFR2特异性的介导参与了VEGF在CD34 造血干/祖细胞内的信号传导.
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关 键 词: | CD34 造血干/祖细胞 血管内皮生长因子 血管内皮生长因子受体 信号传导与转录活化因子 |
修稿时间: | 2003年9月18日 |
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