前列腺癌特异DD3基因实时荧光定量PCR检测方法建立及初步应用

目的：建立实时荧光定量PCR检测特异DD3基因方法，探讨其在前列腺癌早期诊断中的应用价值．方法：根据Genebank中的DD3 mRNA全序列，设计DD3基因的特异引物和探针，构建用于制备DD3基因检测的定量标准品的克隆载体；建立DD3基因的实时荧光定量方法，分别用于前列腺癌患者全血、尿液、前列腺液标本的检测．结果：经稳定性、特异性、重复性和敏感性实验评价，DD3基因实时荧光定量PCR方法的最低检测限为1．64×10^3拷贝／L，线性范围为1．64×10^3～1．64×10^15拷贝／L．对临床收集的19份前列腺癌患者，20份非前列腺癌患者、30份健康者的全血、尿液及前列腺液标本进行检测．19份前列腺癌患者标本中阳性率分别为100％（全血）、80％（尿液）、100％（前列腺液）；20份非前列腺癌患者标本中只有1份前列腺液出现低拷贝值（1×10^5拷贝／L）；30份健康者标本均为阴性．在全血、尿液、前列腺液标本中，前列腺癌患者DD3 mRNA含量明显高于非前列腺癌患者和健康者（P〈0．05）．结论：DD3基因是一种用于前列腺癌早期诊断的特异性指标，可用于生物体液中少量癌细胞的检测，在前列腺癌早期诊断、微转移诊断、预后判断、指导治疗等方面均具有潜在的应用价值．

Establishment and application of DD3 gene detection with real-time fluorescence quantified reverse transcription polymerase chain reaction in patients with prostate cancer