|
|||||
|
|
| 多特异性内参照模板的构建及应用 | |
| 引用本文： | 张万君,梅长林,叶朝阳,赵学智,孙田美,孙为民. 多特异性内参照模板的构建及应用[J]. 中国免疫学杂志, 2005, 21(3): 207-209,212 |
| 作者姓名： | 张万君 梅长林 叶朝阳 赵学智 孙田美 孙为民 |
| 作者单位： | 1. 沈阳军区总医院血液净化科,沈阳 110016 2. 第二军医大学长征医院,解放军肾脏病中心,上海,200003 3. 第二军医大学免疫学教研室,上海,200433 |
| 摘 要： | 目的：构建多特异性内参照模板，用于Fas、FasL、GB、P、TIA-1和β-actin的竞争性PCR定量。方法：体外合成DNA单链，PCR扩增后，得到2个片段。片段1长。145bp，含有Fas、FasL、GB、P、TIA-1和pactin的5’引物序列；片段2长147bp，含有相同基因的3’引物序列。将片段1、2分别克隆在载体PKF3上。结果：克隆载体经酶切鉴定及DNA序列测定，证实为本实验所设计的多特异性内参照模板，以此为模板，用不同的引物进行PCR扩增，即可得到相应的竞争内参照。应用多特异性内参照模板对移植肾急性排斥患者外周血淋巴细胞中TIA-1进行定量，结果显示，底物量在一定范围内，靶序列和竞争性内参照模板的扩增效率基本一致，尤其是在指数期。这一结果同样适用于Fas、FasL、GB、P和β-actin的定量。结论：本实验构建的多特异性内参照模板可用于6种基因的竞争性PCR检测，为进一步研究打下了基础。 |
| 关 键 词： | 多特异性内参照模板 竞争性RT-PCR 基因 |
| 文章编号： | 1000-484X(2005)03-0207-04 |
Construction of a multispecific internal control for competitive RT-PCR analysis of genes |
|
| ZHANG Wan-jun,MEI Chang-Lin,YE Chao-Yang,ZHAO Xue-zhi,SUN Tian-Mei,SUN Wei-Min. Construction of a multispecific internal control for competitive RT-PCR analysis of genes[J]. Chinese Journal of Immunology, 2005, 21(3): 207-209,212 | |
| Authors: | ZHANG Wan-jun MEI Chang-Lin YE Chao-Yang ZHAO Xue-zhi SUN Tian-Mei SUN Wei-Min |
| Affiliation: | ZHANG Wan-Jun,MEI Chang-Lin,YE Chao-Yang,ZHAO Xue-Zhi,SUN Tian-Mei,SUN Wei-Min.Nephropathy Center,Changzheng Hospital,Shanghai 200003,China |
| Abstract: | |
| Keywords: | Multispecific internal control Competitive RT-PCR Gene |
| 本文献已被 CNKI 维普 万方数据 等数据库收录！ | |