| 蝎镇痛抗菌活性肽BmK AS的融合表达及蛋白切割 |
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| 引用本文： | 杨东萍,崔勇,张敬武,杜秉娜,王月秋,张景海.蝎镇痛抗菌活性肽BmK AS的融合表达及蛋白切割[J].沈阳药科大学学报,2015(2):148-153. |
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| 作者姓名： | 杨东萍 崔勇 张敬武 杜秉娜 王月秋 张景海 |
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| 作者单位： | 沈阳药科大学生命科学与生物制药学院;沈阳药科大学医疗器械学院;大连市药品检验所 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(81473432) |
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| 摘 要： | 目的构建镇痛抗菌活性肽BmK AS原核融合表达载体,实现可溶性表达,获得重组活性肽BmK AS。方法利用本实验室已构建成功的pET 28a-AS质粒,设计引物经过聚合酶链式反应,将目的基因克隆至pET 32a载体中,构建融合表达载体pET 32a-AS,优化诱导表达条件,实现BmK AS在大肠杆菌BL21(DE 3)中的融合可溶性表达,通过金属离子螯合亲和薄层色谱法对重组蛋白进行初步分离纯化,获得重组融合蛋白后采用凝血酶进行切割去除纯化标签,经SDS-PAGE检测切割效果。结果成功构建重组表达质粒,优化得到低温诱导促进蛋白可溶性表达的方法;采用金属离子螯合亲和薄层色谱法获得重组蛋白;电泳结果表明凝血酶可以切割融合蛋白。结论实现活性肽BmK AS在大肠杆菌中的融合可溶性表达,经凝血酶切割后获得重组镇痛抗菌活性肽BmK AS,为后续药理活性研究奠定基础。
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| 关 键 词： | 镇痛抗菌活性 可溶性表达 融合 分离 纯化 凝血酶 |
Expression of analgesic-antimicrobial peptide BmK AS from scorpion in fusion form and recombinant protein hydrolysis |
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| YANG Dong-ping;CUI Yong;ZHANG Jing-wu;DU Bing-na;WANG Yue-qiu;ZHANG Jing-hai.Expression of analgesic-antimicrobial peptide BmK AS from scorpion in fusion form and recombinant protein hydrolysis[J].Journal of Shenyang Pharmaceutical University,2015(2):148-153. |
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| Authors: | YANG Dong-ping;CUI Yong;ZHANG Jing-wu;DU Bing-na;WANG Yue-qiu;ZHANG Jing-hai |
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| Institution: | YANG Dong-ping;CUI Yong;ZHANG Jing-wu;DU Bing-na;WANG Yue-qiu;ZHANG Jing-hai;School of Life Science and Biopharmaceutics,Shenyang Pharmaceutical University;School of Medical Devices,Shenyang Pharmaceutical University;Dalian Institute for Drug Control; |
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