| 染色体驱动蛋白KIF4A稳定低表达胃癌细胞系的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 钟铠泽,赵健,李陪,陈蔚文,朱长军,董智雄. 染色体驱动蛋白KIF4A稳定低表达胃癌细胞系的构建及鉴定[J]. 国际生物医学工程杂志, 2014, 37(1): 22-25,I0004,I0005 |
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| 作者姓名： | 钟铠泽 赵健 李陪 陈蔚文 朱长军 董智雄 |
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| 作者单位： | 钟铠泽 (山东大学齐鲁医院胸外科,济南,250012)； 赵健 (山东大学齐鲁医院胸外科,济南,250012)； 李陪 (300387,天津师范大学分子细胞系统生物学重点实验室)； 陈蔚文 (山东大学医学院生物化学与分子生物化学研究所,济南,250012)； 朱长军 (300387,天津师范大学分子细胞系统生物学重点实验室)； 董智雄 (300387,天津师范大学分子细胞系统生物学重点实验室)； |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金面上项目(项目编号：31271485),国家自然科学基金资助项目(项目编号：81372764)2011年教育部“新世纪优秀人才支持计划”资助项目(项目编号：NCET-11-1066)天津市应用基础与前沿技术研究计划重点资助项目(项目编号：12JC2DJC21400)国家自然科学基金青年基金项目(项目编号：31301138)天津师范大学中青年教授学术创新推进计划资助项目(项目编号：52XC1001)天津师范大学校级项目校博士基金资助项目(项目编号：52XB1104)天津师范大学“渤海学者”基金(项目编号：2006BS03066)山东省优秀中青年科学家科研奖励基金资助项目 |
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| 摘 要： | 目的 构建稳定低表达染色体驱动蛋白KIF4A的胃癌细胞系,观察KIF4A低表达细胞的有丝分裂期纺锤体中央区的形成.方法 针对人类驱动蛋白KIF4A mRNA的编码区设计特异性siRNA序列,构建KIF4A短发夹RNA（shRNA）表达质粒pGPU-GFP-KIF4A.将质粒转染胃癌细胞SGC-7901,经过G418筛选获得稳定低表达KIF4A的细胞株.使用蛋白免疫印迹方法鉴定细胞株内KIF4A蛋白的敲降效果,并通过细胞免疫荧光染色法观察细胞纺锤体中央区的形成.结果 成功获得了3株不同水平稳定低表达KIF4A的SGC-7901细胞株（SGC-shKIF4A）和稳定表达无意义shRNA的对照细胞（SGC-shNC）;同时,与对照细胞SGC-shNC相比,SGC-shKIF4A细胞中有丝分裂纺锤体中央区延长,并随KIF4A蛋白表达水平的降低而增加.结论 成功构建了不同水平稳定低表达KIF4A蛋白的胃癌细胞SGC-shKIF4A,为进一步研究驱动蛋白分子KIF4A的功能及其在胃癌发生发展过程中的作用奠定基础.
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| 关 键 词： | KIF4A 有丝分裂 纺锤体中央区 小分子干扰RNA 胃癌细胞 |
Construction and identification of chromokinesin KIF4A knockdown gastric cancer cell lines |
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| Zhong Kaize,Zhao Jian,Li Pei Chen Weiwen Zhu Changjun Dong Zhixiong. Construction and identification of chromokinesin KIF4A knockdown gastric cancer cell lines[J]. International Journal of Biomedical Engineering, 2014, 37(1): 22-25,I0004,I0005 |
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| Authors: | Zhong Kaize Zhao Jian Li Pei Chen Weiwen Zhu Changjun Dong Zhixiong |
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| Affiliation: | 1.Department of Thoracic Surgery, Qilu Hospital of Shandong University, Jinan 250012, China;) |
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| Abstract: | Objective To construct stable chromokinesin KIF4A knockdown gastric cancer cell lines （SGC-7901） and study the mitotic spindle midzone formation in these cells.Methods Short hairpin RNA （shRNA） expression plasmids of pGPU-GFP-shKIF4A,pGPU-GFP-shNC specific targetting KIF4A and non-sense DNA sequences were constructed respectively and then transfected into SGC-7901 cells.The cells were cultured in selection medium containing G418 to form single clones.Stable KIF4A shRNA expressing SGC-7901 cells were picked up under an fluoroscent microscope and identified by Western Blot.The spindle midzone in these cells was analyzed after immunofluorescence staining.Results Three cell lines stably expressing KIF4A shRNA and one with shNC were successfully constructed.Compare to the control cell line,KIF4A knockdown cell lines represented remarkable elongation of spindle midzone and the less the KIF4A,the longer spindle midzone.Conclusions Stable KIF4A knockdown SGC-7901 cell lines were successfully constructed that can serve for further study of KIF4A ＇ s function and its role in proliferation and development of gastric cancer. |
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| Keywords: | KIF4A Mitosis Spindle midzone siRNA Gastric cancer cell |
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