靶向骨桥蛋白的小干扰RNA对MRL/Lpr小鼠狼疮肾炎的治疗作用

目的观察骨桥蛋白(OPN)的小干扰RNA(si RNA)对SLE动物模型MRL/Lpr小鼠24 h尿蛋白、脾组织中Treg和Th17细胞的表达、肾脏的病理改变的影响,探讨OPN si RNA对狼疮肾炎的治疗作用。方法 25只MRL/Lpr小鼠随机分为对照组、空载体组、OPN-si RNA1组、OPN-si RNA2组及OPN-si RNA3组,每组5只,RT-PCR法检测小鼠肾脏组织中OPN m RNA的表达水平;免疫组化法检测小鼠肾脏组织中OPN蛋白的表达水平;考马斯亮蓝染色法检测24 h尿蛋白含量;ELISA法检测小鼠血清中抗ds DNA抗体水平;流式细胞术检测小鼠脾组织中Treg细胞和Th17细胞的表达水平;病理切片苏木精-伊红(HE)染色法观察5组小鼠肾脏的病理变化。结果 OPN si RNA表达载体可以在MRL/Lpr小鼠的肾脏中表达;注射后6周OPN-si RNA1组、OPN-si RNA2组和OPN-si RNA3组中MRL/Lpr小鼠肾脏组织中OPN m RNA和蛋白的表达水平明显低于对照组和空载体组,差异有统计学意义(P<0.05);MRL/Lpr小鼠的24 h尿蛋白含量和抗ds DNA抗体在治疗前5组没有差异,OPN-si RNA作用后2周和4周小鼠24 h尿蛋白含量和抗ds DNA抗体水平下降,随着OPN-si RNA作用时间的延长小鼠24 h尿蛋白含量和抗ds DNA抗体水平逐渐下降,注射后6周MRL/Lpr小鼠的24 h尿蛋白含量和抗ds DNA抗体开始升高,但仍低于对照组和空载体组,差异有统计学意义(P<0.05);OPN-si RNA作用后MRL/Lpr小鼠脾组织中Th17细胞占CD4+T细胞的百分比明显下降,而Treg细胞占CD4+T细胞的百分比上升,与对照组和空载体组比较差异有统计学意义(P<0.05);OPN-si RNA作用后肾小球减小、肾小球的浸润的炎性细胞减少,与对照组和空载体组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MRL/Lpr小鼠注射OPN si RNA载体后,OPN m RNA和蛋白的表达水平下降,24 h尿蛋白含量和抗ds DNA抗体水平下降,脾组织中Th17细胞的百分比下降,Treg细胞的百分比上升,肾脏中炎性细胞的浸润减少,说明OPN si RNA可调节狼疮小鼠Th17/Treg细胞的平衡并对狼疮肾炎有一定的治疗作用。

The therapeutic effect of osteopontin siRNA on lupus nephritis of MRL/Lpr mice

PANG Chunyan;ZHANG Wei;LIU Yuan;CHANG Zhifang;WANG Yongfu(Department of Rheumatology ＆ Institute of Immunology and Rheumatology, First Affiliated Hospital, Baotou Medical College, Baotou 014010, China;Inner Mongolia Key Laboratory of Autoimmunity, Baotou 014010, China)