抑制糖原合酶激酶活性对老龄大鼠内皮祖细胞增殖的作用机制

【摘要】 目的 探讨抑制糖原合酶激酶3β（GSK3β）活性对老龄大鼠内皮祖细胞（EPC）增殖的作用机制。 方法 密度梯度离心法分离培养老龄大鼠骨髓源性EPC，取对数生长期的EPC，分别加入表达催化GSK3β失活的GSK3β KM基因的重组缺陷型腺病毒pMSCV GSK3β KM（基因转染组）或空病毒pMSCV GFP（对照组）。采用镜下计数法及四氮唑溴盐比色法（MTT）测定EPC增殖能力，荧光激活细胞分离仪（FACS）分析各组EPC细胞周期变化。采用蛋白印迹法测定Wnt信号通路中磷酸化糖原合酶激酶3β（pGSK 3β）、β 连环蛋白（β catenin）及细胞周期蛋白D1(cyclinD1)的蛋白表达。 结果 与对照组比较，基因转染组EPC数量显著增加(P＜001）；MTT法检测基因转染组EPC在490 nm 吸光度值与对照组比较差异有统计学意义（P＜001）；FACS分析显示基因转染组细胞周期S期比例较对照组显著增加（P＜001）；蛋白印迹法测定显示，与对照组比较，基因转染组pGSK 3β、β catenin及cyclinD1的蛋白表达显著增加（P＜001）。 结论 抑制EPC的GSK 3β活性可通过激活Wnt信号通路促进老龄大鼠EPC的增殖能力。