lncRNA HIT对骨肉瘤组织和细胞U2OS顺铂抵抗的影响及其机制

目的:探究长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）HIT与骨肉瘤细胞顺铂（cisplatin，DDP）抵抗的关系及其上皮间充质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）的相关机制。方法：选择天津医院骨科2017 年6 月至2018 年6 月42 例骨肉瘤组织及相应癌旁组织（距癌变边缘>5 cm）标本，采用qRT-qPCR 检测骨肉瘤组织及相应癌旁组织中HIT 及EMT标志物Snail、E-钙黏蛋白（E-cadherin）mRNA的表达水平。构建DDP抵抗的人骨肉瘤U2OS细胞株及人肾上腺293T细胞株作为抵抗组及对照组，采用慢病毒转染两组表达靶向HIT的siRNA载体于抵抗组细胞中作为干扰A组及B组，同时转染HIT过表达载体及空白载体构建HIT 过表达的U2OS细胞株及空白U2OS细胞株分别作为过表达组及空白组。MTT实验检测各组细胞DDP半抑制浓度（IC50），qRT-PCR实验检测各组细胞中HIT、Snail 及E-cadherin mRNA的表达水平，Western blotting 检测各组细胞Snail 及Ecadherin的表达水平，RNA结合蛋白免疫沉淀（RNA-IP）实验检测U2OS 及293T 细胞中HIT 与Snail 蛋白分子的结合情况。结果：骨肉瘤组织中HIT及Snail mRNA表达显著高于癌旁组织、E-cadherin mRNA表达显著低于癌旁组织，且骨肉瘤组织中HIT与E-cadherin mRNA表达呈显著负相关(均P<0.01)；抵抗组细胞DDP IC50显著高于对照组、干扰A组及B组细胞，过表达组DDP IC50显著高于空白组(均P<0.01)；抵抗组细胞HIT 表达显著高于对照组，干扰A组及B组细胞HIT 表达显著低于抵抗组及对照组，过表达组HIT表达显著高于空白组（均P<0.05 或P<0.01）；抵抗组细胞Snail 、E-cadherin mRNA表达水平显著高于或低于对照组、干扰A组及干扰B组，过表达组E-cadherinmRNA显著低于空白组；抵抗组细胞Snail 蛋白表达水平显著高于对照组、干扰A组及B组细胞，E-cadherin 蛋白表达水平则显著低于对照组、干扰A 组及B 组细胞，过表达组Snail 蛋白表达水平显著高于空白组(P<0.05或P<0.01）；在U2OS及293T细胞中，免疫磁珠介导Anti-snail 抗体下拉HIT的表达水平显著高于对照IgG抗体下拉HIT的表达水平（P<0.01）。结论：HIT通过正调控Snail蛋白水平，抑制E-cadherin的转录活性，从而促进骨肉瘤细胞EMT及DDP抵抗的发生。

Effect and mechanism of lncRNA HIT on cisplatin resistance in osteosarcoma tissues and U2OS cells