eEF1A1低表达对肝癌细胞凋亡、增殖与迁移的影响及eEF1A1/A2与ANXA7间的相互作用

摘 要：［目的］研究shRNA抑制eEF1A1表达对肝癌Hca-P细胞凋亡、增殖、迁移的影响，并通过分别下调eEF1A1和ANXA7的表达，探讨肝癌Hca-P细胞中eEF1A1、eEF1A2与ANXA7表达的相关性及潜在的相互作用。［方法］ 构建靶向eEF1A1基因的shRNA质粒表达载体，瞬时转染至小鼠肝癌Hca-P细胞中，设无处理组（CON）、eEF1A1-shRNA组(eEF1A1-shRNA)、转染pGPU/GFP/Neo-NC的阴性对照组（NC）三组细胞进行实验。采用实时荧光定量PCR和Western blot技术检测eEF1A1的抑制效果，并分别检测各组eEF1A2、ANXA7在mRNA和蛋白水平的表达。CCK-8法、流式细胞仪、Transwell小室分别检测对细胞增殖、凋亡、迁移的影响。此外，复苏已稳定低表达ANXA7的Hca-P细胞，通过实时荧光定量PCR和Western blot技术检测无处理组（CON)、ANXA7-shRNA转染组（ANXA7-shRNA）、阴性对照组（NC）三组Hca-P细胞中eEF1A1、eEF1A2在mRNA和蛋白水平的表达。［结果］ eEF1A1靶向shRNA成功下调小鼠肝癌Hca-P细胞中eEF1A1基因的表达。流式细胞仪检测显示，CON组、eEF1A1-shRNA组、NC组细胞凋亡率分别为2.85%±0.37%、4.71%±0.21%和3.01%±0.33%，eEF1A1-shRNA组的细胞凋亡较CON组和NC组明显增加(P<0.05)；CCK-8实验发现，eEF1A1-shRNA转染细胞后细胞增殖能力较CON组和NC组明显下降；Transwell实验显示，CON组、eEF1A1-shRNA组、NC组迁移细胞数目为123.75±9.26、66.84±17.47、115.31±12.59，eEF1A1-shRNA组细胞迁移能力较CON组和NC组显著减弱（P<0.05）。qRT-PCR和Western blot检测显示，eEF1A1-shRNA组eEF1A2、ANXA7在mRNA和蛋白水平的表达量较CON组和NC组明显降低(P<0.05)，相较其无处理组的蛋白表达水平，eEF1A2和ANXA7分别下降了57%和21%；ANXA7-shRNA组中eEF1A1、eEF1A2在mRNA和蛋白水平的表达量较CON组和NC组亦明显降低(P<0.05)。［结论］ 通过靶向eEF1A1的shRNA使eEF1A1低表达，可诱导细胞凋亡，抑制细胞的增殖能力及迁移能力。eEF1A1、eEF1A2与ANXA7的表达密切相关，且eEF1A1与ANXA7存在相互作用，可能共同参与调控肿瘤的发生与发展。