基于16S rDNA测序探讨大黄䗪虫丸调控肠道菌群抑制大鼠肾纤维化的作用机制

目的 从肠道菌群角度研究大黄?虫丸（DHZCW）对腺嘌呤诱导的肾纤维化大鼠的作用及机制。方法 将36只SD大鼠随机分为6组：空白组、模型组、大黄?虫丸高、中、低剂量组（0.168、0.084、0.042 g·kg^-1）、吡非尼酮组（200 mg·kg^-1），每组6只。除空白组外，其余各组用腺嘌呤混悬液250 mg·kg^-1灌胃造模28 d，再进行药物干预4周，在代谢笼中收集大鼠尿液，测定肾功能指标尿素氮（BUN）、尿素（Urea）、尿肌酐（Crea）、胱抑素C（Cys C）、24小时尿蛋白（24 h TP）。收集肾脏样本并对其苏木素-伊红（HE）染色、马松（Masson）染色，观察各组大鼠肾组织病理变化，采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测关键效应蛋白α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原（ColⅠ）、Ⅲ型胶原（ColⅢ）蛋白的表达量。收集大鼠粪便运用高通量测序16S rDNA技术对大鼠菌群进行物种差异性分析。结果 与空白组比较，模型组BUN、Urea、Crea、Cys C、24 h TP含量显著升高（P<0.01），与模型组比较，DHZCW高、中、低剂量组和吡非尼酮组BUN、Urea、Crea、Cys C、24 h TP均显著降低（P<0.01）。与空白组比较，模型组肾组织中出现明显纤维化改变，α-SMA、ColⅠ、ColⅢ蛋白含量也显著升高（P<0.01）；与模型组比较，DHZCW高剂量组和吡非尼酮组组织结构基本正常，未见明显病理损伤改变，DHZCW中、低剂量组可见纤维化改变，低剂量组较为明显；DHZCW高、中、低剂量组和吡非尼酮组中的α-SMA、ColⅠ、ColⅢ蛋白含量显著降低（P<0.01），说明DHZCW能有效减少胶原异常沉积而抑制肾纤维化。肠道菌群来看，门水平上，与空白组比较，模型组中厚壁菌门（Firmicutes）的丰度明显增加，拟杆菌门（Bacteroidetes）丰度减少，二者比例明显失调。科水平上，模型组降低了毛螺菌科（Lachnospiraceae）、前蹄菌科（Prevotellaceae）、未分类拟杆菌科（Bacteroidota_unclassified），增加了瘤胃球菌科（Ruminococcaceae）、乳杆菌科（Lactobacillaceae）、颤螺旋菌科（Oscillospiraceae）菌群的丰度。属水平上，模型组的未分类厚壁菌（Firmicutes_unclassified）、未分类拟杆菌属（Bacteroidota_unclassified）、普雷沃氏菌属_UCG-001（Prevotellaceae_UCG-001）等菌群丰度显著降低，UCG-005、梭状芽孢杆菌（Clostridia_UCG-014_unclassified）等菌群丰度增加。与模型组比较，DHZCW能降低潜在致病菌而升高有益菌丰度，调节肠道菌群。结论 DHZCW能有效改善肾功能和抑制肾纤维化，其作用机制可能与调节肠道菌群有关。

Mechanism of Dahuang Zhechongwan in Inhibiting Renal Fibrosis in Rats by Regulating Intestinal Flora Based on 16S rDNA Sequencing