microRNA-181通过靶向PTEN对胰腺泡细胞自噬及凋亡的影响及作用机制研究

目的探究对胰腺泡细胞自噬及凋亡的影响及作用机制。方法用100μmol/L的雨蛙素(cerulein)处理大鼠胰腺泡细胞AR42J, miR-181a mimic及miRNA mock分别转染细胞后,RT-PCR检测miR-181a、PTEN表达水平。生物信息预测两者关系并用荧光素酶报告实验验证。细胞分为Control、cerulein、miR-181a mimic、pc-PTEN 及 miR-181a mimic + pcDNA PTEN (pc-PTEN)组,miR-181a mimic 及 pc-PTEN 转染细胞后,CCK8检测细胞活性,Hoechst染色检测细胞凋亡,Western印迹检测PTEN, PCNA、Bcl-2, Bax、cleaved Caspase-9, LC3、Beclin1、P62、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt, mTOR 和 p-mTOR 的表达,免疫荧光检测LC3表达。雷帕霉素与miR-181a mimic共处理细胞后,蛋白印迹检测LC3B、Beclin1及p62表达水平,CCK8检测细胞活性,Hoechst染色检测细胞凋亡。结果雨蛙素可下调miR-181a及上调PTEN表达。miR-181a mimic可显著降低PTEN wt的荧光素酶活性。miR-181a mimic + pc-PTEN能部分逆转pc-PTEN对PTEN和cleaved Caspase-9表达、凋亡细胞百分比、Bax/Bcl-2比值、PCNA表达、细胞存活率、LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ比值、Beclin1表达、LC3荧光值及p62表达的调节作用;同时,miR-181a mimic + pc-PTEN还能逆转pc-PTEN对PI3K/AKT/mTOR信号通路激活的抑制作用。最后,Rapamycin + miR-181a mimic能逆转miR-181a mimic对LC3B、Beclin1和细胞凋亡的抑制作用,及对p62和细胞存活率的促进作用。结论 miR-181a可通过靶向下调PTEN抑制胰腺泡细胞自噬及凋亡的发生。

microRNA-181 Works on Pancreatic Acinar Cell Autophagy and Apoptosis via Target PTEN

ZHAO Mingyi;CHEN Tao;WU Tianming(Department of Extraordinary, People's Hospital of Beijing Daxing District, Beijing, 102600, China;Department of Hepatobiliary Surgery, Beijing Chao-yang Hospital, Capital Medical University, Beijing, 100020, China)