| SD大鼠βB2-晶体蛋白的克隆、表达与纯化 |
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| 引用本文： | 刘梦蕾,李闻捷,蔡刚,张燕,张军.SD大鼠βB2-晶体蛋白的克隆、表达与纯化[J].中华生物医学工程杂志,2005,11(1). |
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| 作者姓名： | 刘梦蕾 李闻捷 蔡刚 张燕 张军 |
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| 作者单位： | 第二军医大学长海医院中心实验室,上海,200433 |
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| 摘 要： | 目的得到大量纯的βB2-晶体蛋白,为研究其生物学特性及潜在的生理功能打下基础.方法从SD大鼠晶状体中抽提总RNA,用RT-PCR法克隆βB2-晶体蛋白的cDNA,装入原核表达载体pGEX-4T-1后用萘啶酮酸(IPTG)诱导表达;用GST纯化系统纯化并用蛋白水解酶对融合蛋白进行酶切.结果βB2-pGEX重组质粒经测序及限制性内切酶分析等鉴定,与预期结果一致;IPTG诱导后,蛋白质在大肠杆菌BL21中得到高效表达.纯化酶切后,经Westen blot 方法验证,得到了高纯度的βB2-晶体蛋白.结论成功构建了βB2-pGEX原核表达载体,高效表达了βB2-GST融合蛋白,经纯化和酶切得到了高纯度的βB2-晶体蛋白,为进一步研究其生物学特性及潜在的生理功能打下基础.
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| 关 键 词： | βB2-晶体蛋白 克隆 表达 纯化 大肠杆菌 |
Clone,Expression and Purification of SD rat βB2-Crystallin |
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