| 实时定量RT-PCR方法检测豚鼠TSHR免疫BALB/c小鼠甲状腺TSHR的表达 |
| |
| 引用本文： | 朱云娟,黄丽娟,陈宁,沈炳玲,陆凤先.实时定量RT-PCR方法检测豚鼠TSHR免疫BALB/c小鼠甲状腺TSHR的表达[J].天津医科大学学报,2005,11(4):509-511,514. |
| |
| 作者姓名： | 朱云娟 黄丽娟 陈宁 沈炳玲 陆凤先 |
| |
| 作者单位： | 1. 天津医科大学寄生虫学教研室,天津,300070
2. 天津医科大学病理教研室,天津,300070 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金资助（编号：30370682）;天津市科技发展计划项目（编号：05YFGDSF02700） |
| |
| 摘 要： | 目的：建立外标准法SYBR GREENI实时定量（real—time）RT—PCR方法，以检测豚鼠TSHR分子免疫对BALB／c小鼠甲状腺TSHRmRNA的表达的影响。方珐：取正常BALB／c小鼠甲状腺提取甲状腺总RNA．逆转录后进行PCR，得到333bp扩增产物。经回收纯化后作为real—time PCR的标准品。稀释为10^6、10^5、10^4、10^3、10^2、10^1拷贝，制作标准曲线；并同时进行普通PCR，比较其灵敏度。优化反应条件使溶解曲线有特异扩增。检测豚鼠TSHR分子免疫的BALB／c小鼠甲状腺TSHR mRNA的表达。结果：建立的外标准法SYBR GREENI实时定量RT—PCR方法可以灵敏的检测到10copy的核酸，灵敏度为普通PCR的10^4倍；溶解曲线只有特异峰，溶解温度为82．9℃。没有明显的引物二聚体和非特异峰出现。不同标准点批间变异系数范围为5．8％．14．3％（n=6）。与对照组比较，TSHR大分子免疫的BALB／c小鼠甲状腺组织TSHR mRNA水平显著升高（P〈0．05）。结论：外标准法SYBR GREENI实时定量lit—PCR具有灵敏度高，特异性强，重复性好的特点，比普通PCR更精确地检测出小鼠甲状腺组织TSHR mRNA的水平。
|
| 关 键 词： | 外标准法实时定量RT—PCR TSHR mRNA SYBR GREEN I |
| 文章编号： | 1006-8147（2005）04-0509-04 |
| 收稿时间： | 2005-10-11 |
| 修稿时间： | 2005-10-11 |
Real-time RT-PCR for detection of expression of TSHR mRNA in thyroid of BALB/c mice immunized by guinea pig TSHR |
| |
| ZHU Yun-juan,HUANG Li-juan,CHENG Ning,SHEN Bing-ling,LU Feng-xian.Real-time RT-PCR for detection of expression of TSHR mRNA in thyroid of BALB/c mice immunized by guinea pig TSHR[J].Journal of Tianjin Medical University,2005,11(4):509-511,514. |
| |
| Authors: | ZHU Yun-juan HUANG Li-juan CHENG Ning SHEN Bing-ling LU Feng-xian |
| |
| Institution: | 1.Department of Human Parasitology, Tianjin 300070, China; 2. Department of Pathophysiology, Basic Medicine College, Tianjin Medical University |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Real-time RT-PCR with the external standard TSHR mRNA SYBR GREEN I |
| 本文献已被 CNKI 维普 万方数据 等数据库收录！ |
