| 日本血吸虫童虫信号序列捕捉cDNA文库的构建及初步筛选 |
| |
| 引用本文： | 余传信,殷旭仁,李健,许永良,周永华,高琪,梁幼生.日本血吸虫童虫信号序列捕捉cDNA文库的构建及初步筛选[J].中国病原生物学杂志,2007,2(6):417-420. |
| |
| 作者姓名： | 余传信 殷旭仁 李健 许永良 周永华 高琪 梁幼生 |
| |
| 作者单位： | 卫生部寄生虫病预防与控制技术重点实验室,江苏省寄生虫病分子生物学研究重点实验室,江苏省寄生虫学重点学科,江苏省血吸虫病防治研究所,江苏无锡,214064 |
| |
| 摘 要： | 目的建立日本血吸虫童虫信号序列捕捉cDNA(SST-cDNA)文库,筛选日本血吸虫病潜在的疫苗候选分子。方法抽提日本血吸虫童虫mRNA,并转录合成cDNA。将纯化的cDNA插入到载体pAPtag2中,构建SST-cDNA文库。将cDNA文库质粒转染到COS7细胞中进行蛋白表达,通过检测转染细胞中胎盘碱性磷酸酶(PLAP)的活性来判定插入的血吸虫童虫cDNA片段中是否带有信号序列。测定阳性克隆中外源性cDNA的核苷酸序,并通过Blast与Gen-Bank、EST数据库进行比对确定其性质。采用快速扩增cDNA未端序列方法获得基因的全长cDNA序列。用SignalP3.0、TMPred、TargetP服务器对带有信号序列基因的特征进行分析和预测。结果日本血吸虫童虫cDNA被插入到真核表达载体pAPtag2中,成功构建日本血吸虫童虫SST-cDNA文库。限制性内切酶分析表明SST-cDNA文库的容量为5×106cfu。SST-cDNA文库质粒转染到COS7细胞中后,通过近缘筛选获得21个带有信号肽cDNA序列,其中4个为未知新基因序列,5个为已知功能基因,12个与血吸虫EST序列同源。获得了8个基因的全长cDNA序列,演绎氨基酸序列特征分析表明,其中5个为膜结合蛋白基因,3个为外分泌蛋白基因。结论本研究成功构建了日本血吸虫童虫SST-cDNA文库,初步筛选获得了8个带信号肽的外分泌或膜结合蛋白分子基因。
|
| 关 键 词： | 血吸虫 日本 外分泌蛋白 膜蛋白 信号序列捕捉方法 |
| 文章编号： | 1673-5234（2007）06-0417-04 |
| 收稿时间： | 2007-01-25 |
| 修稿时间： | 2007-05-23 |
Construction and preliminary screening of signal sequence trapping cDNA library of Schistosoma japonicum somula |
| |
| YU Chuan-xin,YIN Xu-ren,LI Jian,XU Yong-liang,ZHOU Yong-hua,GAO qi,LIANG You-sheng.Construction and preliminary screening of signal sequence trapping cDNA library of Schistosoma japonicum somula[J].Journal of Pathogen Biology,2007,2(6):417-420. |
| |
| Authors: | YU Chuan-xin YIN Xu-ren LI Jian XU Yong-liang ZHOU Yong-hua GAO qi LIANG You-sheng |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Schistosome japonica secretion protein membrane binding protein signal sequence trapping method |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
|
