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| 应用核糖体展示技术筛选制备抗TNF-α人源抗体的研究 | |
| 引用本文： | 赵小玲,陈伟强,李静梅,张素娟,田露芳,王亮,弓景波,杨志华. 应用核糖体展示技术筛选制备抗TNF-α人源抗体的研究[J]. 细胞与分子免疫学杂志, 2009, 25(2) |
| 作者姓名： | 赵小玲 陈伟强 李静梅 张素娟 田露芳 王亮 弓景波 杨志华 |
| 作者单位： | 1. 军事医学科学院卫生学环境医学研究所应激医学研究室,天津,300050 2. 解放军第254医院,天津,300142 3. 山西医科大学第一附属医院耳鼻喉科,山西,太原,030001 |
| 摘 要： | 目的:构建人源核糖体展示抗体库,筛选制备抗TNF-α的特异性、高亲和力三结构域抗体(VH/K).方法:应用核糖体抗体库技术,从类风湿关节炎患者的外周血淋巴细胞中分离、构建核糖体展示VH/K基因库;体外转录翻译后,以TNF-α重组蛋白作纯化抗原,采用亲和富集法淘选TNF-α特异性抗体基因;将筛选获得的VH/K基因克隆并在原核系统pET22b(+)/BL21(DE3)中实现可溶性表达;表达产物经进行ELISA鉴定,并对阳性克隆的生物学特性进行初步研究.结果:成功构建了库容量约为6.7×1012核糖体展示VH/K抗体基因库,在180个筛选克隆中,其中两株抗体TRB21、TRB409显示出极高的ELISA值,序列分析表明两株克隆具有全新的人源抗以TNF-α抗体基因,他们不仅可以特异识别TNF-α而且可以抑制以TNF-α对L929细胞的细胞毒性.结论:人源抗TNF-α特异性抗体的获得,为进一步研制抗TNF-α的特异性、高亲和力基因工程抗体奠定了基础.核糖体展示技术为体外筛选制备全人源抗体提供了一种简便、有效的技术平台. |
| 关 键 词： | 核糖体展示 人源抗体 TNF-α 类风湿性关节炎 |
Preparation of human antibodies to TNF-a using ribosome display technolo-gy |
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| ZHAO Xiao-ling,CHEN Wei-qiang,LI Jing-mei,ZHANG Su-juan,TIAN Lu-fang,WANG Liang,GONG Jing-bo,YANG Zhi-hua. Preparation of human antibodies to TNF-a using ribosome display technolo-gy[J]. Chinese journal of cellular and molecular immunology, 2009, 25(2) | |
| Authors: | ZHAO Xiao-ling CHEN Wei-qiang LI Jing-mei ZHANG Su-juan TIAN Lu-fang WANG Liang GONG Jing-bo YANG Zhi-hua |
| Abstract: | |
| Keywords: | |
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