| Tumstatin-EGFP真核表达载体构建及稳定转染CHO细胞系的建立 |
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| 引用本文： | 姚丽娟,罗以勤,孔建新,赵亮,常珍,濮跃晨,马筱玲.Tumstatin-EGFP真核表达载体构建及稳定转染CHO细胞系的建立[J].山东医药,2008,48(34):27-30. |
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| 作者姓名： | 姚丽娟 罗以勤 孔建新 赵亮 常珍 濮跃晨 马筱玲 |
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| 作者单位： | 安徽医科大学附属省立医院,安徽合肥,230001 |
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| 摘 要： | 目的 构建重组tumstatin-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的分泌型真核表达载体质粒,建立稳定转染的中国仓鼠卵巢细胞系(CHO-K1).方法 利用重叠多聚酶链反应(PCR)技术从pGEM-T/STL质粒和pEGFP-C2质粒中扩增出STL-EGFP,用DNA重组技术将片段定向插入pIRESneo3质粒中,经酶切和序列验证正确后,用lipofectamine 2000转染CHO-K1细胞,通过G418筛选建立稳定转染的CHO细胞系,用逆转录-PCR、Western blot检测tumstatin-EGFP的表达,用倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达.结果 重组真核表达载体正确构建并在CHO细胞获得稳定表达,tumstatin-EGFP基因整合入细胞基因组DNA,培养液上清有融合蛋白tumstatin-EGFP的分泌,绿色荧光蛋白的表达高达95%以上.结论 成功构建了质粒PIRESneo3-STL-EGFP,获得稳定表达tumstatin-EGFP的细胞系.
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| 关 键 词： | 肿瘤抑素 增强型绿色荧光蛋白 融合蛋白 表达载体 |
Construction of tumstatin-EGFP eukaryotic expression vector and establishment of CHO cell line |
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| YAO Li-juan,LUO Yi-qin,KONG Jian-xin,ZHAO Liang,CHANG Zhen,PU Yue-chen,MA You-ling.Construction of tumstatin-EGFP eukaryotic expression vector and establishment of CHO cell line[J].Shandong Medical Journal,2008,48(34):27-30. |
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| Authors: | YAO Li-juan LUO Yi-qin KONG Jian-xin ZHAO Liang CHANG Zhen PU Yue-chen MA You-ling |
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