基于Keap1/Nrf2/ARE信号通路探讨葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠抗氧化应激的作用机制

目的 观察葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝病的改善作用，为临床用药提供科学依据，并为开展其他酒精性相关疾病的研究提供思路和借鉴。方法 采用一次性灌胃给予56%（V/V）红星二锅头酒（12 mL·kg^-1）建立小鼠急性酒精性肝损伤模型，120只雄性ICR小鼠按体质量随机分成空白组、模型组、水飞蓟宾组、葛花组、枳椇子组、葛花-枳椇子1∶1组、葛花-枳椇子1∶2组、葛花-枳椇子2∶1组，每组15只。各给药组按10 mL·kg^-1预防性灌胃相应药物3 d，除空白组外，其余各组小鼠按12 mL·kg^-1分别灌胃给予二锅头酒，于酒后12 h处死小鼠，并观察药物对小鼠肝功能、抗氧化应激能力的影响；苏木素-伊红（HE）染色观察肝脏病理变化；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组小鼠Kelch样ECH相关蛋白1（Keap1）/核因子E₂相关因子2（Nrf2）/抗氧化响应元件（ARE）信号通路相关蛋白表达；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测相关各指标mRNA表达。结果 与正常组比较，模型组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）水平，肝组织中丙二醛（MDA）、活性氧（ROS）含量显著升高（P<0.01）；谷胱甘肽（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）活性显著降低（P<0.01），Keap1 mRNA及蛋白表达明显升高（P<0.05，P<0.01），Nrf2 mRNA及蛋白表达显著降低（P<0.01）；与模型组比较，葛花-枳椇子2∶1组小鼠ALT、AST和ALP水平显著减低（P<0.01），肝脏组织中MDA、ROS水平均显著减低（P<0.01），GSH、SOD水平均显著升高（P<0.01）；肝脏脂肪变损伤均减轻，显著上调Nrf2 mRNA及蛋白表达（P<0.01），显著下调Keap1 mRNA及蛋白表达（P<0.01）。结论 葛花、枳椇子及其配伍组合对小鼠急性酒精性肝损伤有一定的预防作用，其机制可能与调控肝脏内Keap1/Nrf2/ARE信号通路，恢复并上调由乙醇所破坏的肝脏氧化平衡有关，从而有效遏制酒精性肝病的发展。