| 双拷贝和x基因缺失HBV DNA质粒的构建及其细胞转染 |
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| 引用本文： | 宋玉,万谟彬,李闻捷,陈坚,方超平,薛惠斌. 双拷贝和x基因缺失HBV DNA质粒的构建及其细胞转染[J]. 第二军医大学学报, 2003, 24(9): 979-981 |
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| 作者姓名： | 宋玉 万谟彬 李闻捷 陈坚 方超平 薛惠斌 |
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| 作者单位： | 第二军医大学附属长海医院;第二军医大学附属长海医院 |
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| 基金项目： | 上海市重大医学发展重点课题 ( 99ZDI0 0 1) |
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| 摘 要： | 目的:构建双拷贝和x基因缺失的HBV真核细胞复制表达质粒,并研究其在Hep3B肝癌细胞株中对HBV的复制表达效果.方法:利用含HBV DNA(adrⅠ)的质粒,酶切出HBV DNA片段,克隆入哺乳动物细胞表达载体pcDNA3,构建双拷贝HBV DNA的真核表达质粒pcDNA3-ES-HBV2;将原始质粒通过插入人工合成DNA片段和基因重组破坏乙肝病毒x基因区,再克隆入pcDNA3,构建成pcDNA3-KN-F1F2真核表达质粒;用两质粒分别转染Hep3B肝癌细胞株,进行G418筛选的同时用荧光定量PCR法检测细胞培养上清液HBV DNA.结果:(1)成功构建了x基因缺失的HBV真核表达质粒pcDNA3-KN-F1F2及含双拷贝HBV DNA的真核表达质粒pcDNA3-ES-HBV2;(2)对两质粒成功进行细胞转染后,测得第3、6、14天细胞培养上清液中HBV DNA均高表达,两质粒之间差别不明显.结论:构建的质粒可在Hep3B细胞株中表达并引起HBV的复制及分泌;x基因的缺失不影响HBV在Hep3B细胞株中的表达复制.
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| 关 键 词： | 乙肝病毒 x基因 表达载体 HBV复制 基因转染 |
| 文章编号： | 0258-879X(2003)09-0979-03 |
| 修稿时间： | 2002-12-20 |
Construction of double-copy and x gene deleted hepatitis B virus DNA expression plasmid and cells transfection study |
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| SONG Yu ,WAN Mo Bin ,LI Wen Jie ,CHEN Jian ,FANG Chao Ping ,XUE Hui Bin. Construction of double-copy and x gene deleted hepatitis B virus DNA expression plasmid and cells transfection study[J]. Former Academic Journal of Second Military Medical University, 2003, 24(9): 979-981 |
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| Authors: | SONG Yu WAN Mo Bin LI Wen Jie CHEN Jian FANG Chao Ping XUE Hui Bin |
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| Affiliation: | SONG Yu 1,WAN Mo Bin 1*,LI Wen Jie 2,CHEN Jian 3,FANG Chao Ping 2,XUE Hui Bin 4 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | hepatitis B virus x gene vector HBV replication gene transfection |
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