人源脂肪细胞SH2B1β基因的克隆表达

目的获取人源脂肪细胞SH2B1β基因序列，构建SH2B1β-pET28a（＋）重组表达质粒，在大肠杆菌中对其进行表达。方法利用RT—PCR方法从人源分化成熟的脂肪细胞RNA中扩增出SH2B1β的cDNA片段．并插入pET28a（＋）中，转化大肠杆菌BL21（DE3），通过IPTG诱导表达带6xHis标签的融合蛋白。结果PCR和酶切电泳鉴定结果显示SH2B1β基因克隆入载体中，测序结果证实克隆的基因序列与GenBank中的人源SH2B1β序列相符，SDS—PAGE电泳结果表明获得相对分子质量约75000的目的蛋白。结论成功获取了人源脂肪细胞的SH2B1β基因，并在BL21（DE3）中高效表达目的蛋白，为下一步表达纯化SH2B1β重组蛋白及蛋白的初步功能研究奠定基础。