细粒棘球绦虫重组质粒pGEX-Eg95的构建及其在大肠杆菌BL21（DE3）中的表达

目的构建细粒棘球绦虫重组质粒pGEX-Eg95，并研究该质粒在大肠杆菌BL21（DE3）中的表达。方法超声粉碎细粒棘球蚴组织提取总RNA，通过RT—PCR扩增Eg95抗原编码基因；克隆至原核表达载体pGEX—1λT，构建重组质粒pGEX-Eg95；转化大肠杆菌BL21，经异丙基硫代-β—D-半乳糖苷（IPTG）诱导表达后用SDS-PAGE和Western blowing对表达产物进行分析和鉴定。结果RT-PCR扩增出471bp的Eg95抗原编码基因；双酶切证实Eg95抗原编码基因成功插入pGEX-1λT中；SDS-PAGE分析显示表达产物为相对分子质量约42500的重组蛋白，与预期结果一致，表达的蛋白约占菌体总蛋白的21％；Western blot鉴定显示重组蛋白能被细粒棘球蚴感染鼠血清识别。结论成功构建了细粒棘球绦虫重组质粒pGEX-Eg95，该质粒在大肠杆菌BL21中获得了高效融合表达，表达的融合蛋白具有特异的抗原性。