| 兔肌源性干细胞的分离及诱导分化为成骨细胞的观察 |
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| 引用本文： | 张年春,杨志焕,邓志龙.兔肌源性干细胞的分离及诱导分化为成骨细胞的观察[J].中国组织工程研究与临床康复,2004,8(17):3258-3260. |
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| 作者姓名： | 张年春 杨志焕 邓志龙 |
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| 作者单位： | 解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所四室,重庆市,400042 |
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| 摘 要： | 目的:探讨兔肌源性干细胞的分离、鉴定和诱导分化的方法。方法:取2月龄幼兔臀肌1g,采用胶原酶,dispase,胰蛋白酶分步消化,针头过滤,差速贴壁法分离肌源性细胞。用锥虫蓝染色细胞计数描记生长曲线,MTT法间接反映细胞增殖活性。作Bcl-2,Desmin免疫细胞化学染色鉴定肌源性细胞。用分化培养基(DMEM+5mL/LFBS+50mL/LHS+10mg/LBMP2+5g/L维生素C+10mmol/Lβ-甘油磷酸钠+10mg/L地塞米松+10g/L青霉素/链霉素)诱导细胞分化,用Osteocalcin,碱性磷酸酶,Ⅰ型胶原免疫细胞化学染色鉴定成骨前体细胞。结果:用上述方法分离的肌源性细胞呈短梭形或多角形,体积明显小于肌细胞,24h贴壁,接种后36h开始增殖,生长有明显的方向性,原代肌源性干细胞对数生长期为7～9d,16d汇合。第3代肌源性干细胞接种后第3～5天为对数生长期,约8d汇合。细胞汇合后少部分细胞出现双核或三核,甚至出现核链,显示肌细胞分化倾向。约60%～70%的原代肌源性干细胞Bcl-2,Desmin免疫细胞化学染色呈阳性。用成骨细胞分化培养基中培养2周后,大部分细胞Osteocalcin,碱性磷酸酶,Ⅰ型胶原免疫细胞化学染色呈阳性,显示其成骨前体细胞分化。结论:用上述方法分离的肌源性细胞具有干细胞特征,并能在体外分化为成骨前体细胞和肌起源细胞,是一种组织特异性干细胞,即肌
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| 关 键 词： | 干细胞 细胞培养 肌炎 骨化性 |
| 文章编号： | 1671-5926(2004)17-3258-03 |
| 修稿时间： | 2004年1月11日 |
Isolation and induced differentiation of muscle-derived stem cells in rabbits |
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