猪圆环病毒3型SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法的建立及应用 |
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引用本文: | 李卓昕,温树波,孙文超,赵冠宇,庄忻雨,解长占,张赫,肖朋朋,韩继成,高旭,鲁会军,金宁一.猪圆环病毒3型SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法的建立及应用[J].中国病原生物学杂志,2018(9). |
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作者姓名: | 李卓昕 温树波 孙文超 赵冠宇 庄忻雨 解长占 张赫 肖朋朋 韩继成 高旭 鲁会军 金宁一 |
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作者单位: | 延边大学农学院;温州大学病毒学研究所;军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所;吉林大学动物医学院;吉林农业大学动物科技学院 |
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摘 要: | 目的建立针对PCV3的操作简单、重复性好、灵敏度较高的检测方法。方法利用PCR方法扩增PCV3保守区基因片段(312bp),将其克隆到pMD18-T载体,构建重组质粒pMD18-T-PCV3作为阳性标准品质粒。优化反应条件,建立定量检测PCV3的实时荧光定量PCR方法,并进行敏感性、特异性和重复性验证。结果建立的SYBR GreenⅠReal-time PCR方法的Ct值与标准品模板在4.24×10~1~4.24×10~8拷贝/μl范围内呈良好线性关系,其相关系数为0.996,斜率为-4.384。该方法特异性强,与PRRSV、FMDV、JEV、PCV2及PRV均无交叉反应;敏感性为4.24×10~1拷贝/μl,比常规PCR方法高10倍;组间和组内重复试验的变异系数均小于2%。利用实时荧光定量PCR方法对采集的155份猪肺组织进行检测,阳性率为36.13%,高于普通PCR阳性检出率的32.25%。结论建立的PCV3SYBR GreenⅠReal-time PCR方法敏感、特异,可用于猪体PCV3感染的快速检测。
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