| 摘 要： | 目的截短克隆奶牛乳腺炎无乳链球菌溶血素(Hly)基因抗原优势区域,构建重组表达载体,实现原核细胞高效表达,进而对表达产物进行抗原性分析。方法根据GenBank公布的牛源无乳链球菌(CP018623.1)hly基因序列设计引物,以牛乳源性无乳链球菌1886菌株基因组DNA为模板,PCR扩增hly基因片段,构建重组质粒pET-30a-hly并转化至E.coli/BL21(DE3)中,经IPTG诱导高效表达后,并进行SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定。表达产物纯化后经水溶性501佐剂乳化,免疫昆明小白鼠,采用间接ELISA法测定血清抗体滴度。结果成功克隆奶牛乳腺炎无乳链球菌1886菌株hly基因,其碱基长度513bp,编码171个氨基酸殘基,与GenBank公布的牛源无乳链球菌(CP018623.1)Hly基因核苷酸序列及其编码氨基酸序列相似性为100%。重组质粒表达的重组蛋白分子质量单位约为30×103,纯化蛋白含量为1.2mg/ml。Western blot检测重组蛋白可被相应抗体识别。ELISA检测重组蛋白免疫小鼠血清抗体滴度为1∶25 600。结论内蒙古分离株无乳链球菌Ia型hly基因抗原优势序列编码多肽具有良好的抗原性,可以作为候选免疫抗原,为研究其致病机制及新型疫苗奠设计奠定了基础。
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