| 摘 要： | 目的异源表达幽门螺杆菌HpPrtC胶原蛋白酶,并检测其对胶原蛋白的降解活性。方法根据幽门螺杆菌基因组信息中编号hp0169基因的序列设计引物,PCR扩增HpPrtC基因的核苷酸序列,经NdeI和XhoI酶切后构建原核表达载体pET-22b(+)-HpPrtC,转化至E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达后采用亲和层析法纯化重组蛋白,通过检测重组酶处理胶原蛋白后L-亮氨酸的产生量表征其胶原蛋白降解活性。结果 HpPrtC基因编码422个氨基酸,与已知PrtC家族蛋白酶氨基酸序列比对最高相似性40%。克隆HpPrtC基因连接入表达质粒pET-22b(+),将测序正确的表达质粒pET-22b(+)-HpPrtC转化至感受态细胞BL21(DE3),经IPTG诱导表达相对分子质量约为47×103的可溶性蛋白,与预期相符。经亲和层析纯化后的重组蛋白酶降解热变性I型胶原蛋白(可溶、不可溶)和天然I型胶原蛋白的活性分别为922.2±36.2、1168.8±65.6和674.0±13.4,与幽门螺杆菌培养液中胶原蛋白酶对可溶热变性I型胶原蛋白、不可溶热变性I型胶原蛋白和天然I型胶原蛋白活性分别为205.6±21.5、228.4±19.3和123.2±14.5一致。结论幽门螺杆菌定植因子HpPrtC为胶原蛋白酶。通过大肠埃希菌异源表达的重组HpPrtC蛋白具有胶原蛋白酶解活性,为探索该酶在幽门螺杆菌感染定植中的作用机制奠定了基础。
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